서울特別市 保健環境硏究院報 第42號	(2006)

Report of S.I.H.E., 42:506~514	(2006)

HPLC-MSD를 이용한 계란 중

잔류물질의 동시분석

시험팀

홍인석․최윤화․이덕주․이정학

Simultaneous Multi-determination for Antimicrobials in Eggs by HPLC-MSD

Livestock Products Experiment Team

In-suk Hong, Yoon-hwa Choi, Duck-joo Lee and Jung-hark Lee

Abstract

This study was conducted to develop the analytical method about simultaneous determination for enrofloxacin, oxytetracycline and flubendazole on eggs by high performance liquid chromatography-mass selective detector(HPLC-MSD). The three antimicrobials were analyzed by HPLC-MSD and separated satisfactorily on symmetry C18 and the gradient condition of H2O and acetonitrile with 0.1% acetic acid. Two methods of matrix solid phase dispersion(MSPD) and two methods of liquid-liquid extraction(LLE) have been tested as pretreatment procedures for analysis of HPLC-MSD. For the optimized response, the value of various MS parameter as fragment voltage, drying gas flow, nebulizer pressure and drying gas temperature were obtained. The recovery rates of enrofloxacin, oxytetracycline and flubendazole on eggs by MSPD and LLC ranged from 70% to 130%.

The results show that the three antimicrobials were successfully analyzed on eggs using this method. The detection limit of flubendazole was 0.005 µg/g on eggs at the best, and it did not receive interference by the eggs matrix.

Key words : HPLC-MSD, antimicrobials, egg, residue analysis

서  론

축산물중 계란은 가장 손쉽게 섭취할 수 있는 고단백식품원으로서 최근에는 소비자들의 기호에 따라 사육환경이나 사료의 조절을 통하여 특수 영양성분을 강화시킨 특수란들도 다양하게 생산 보급되고 있어 시민들의 식생활에 폭넓게 자리잡고 있다(1).

시민들에게 안전한 축산식품을 공급하기 위하여 닭고기에서는 이미 1990년대 초반부터 항생제의 잔류검사를 실시하여 왔지만 계란을 비롯한 식용란에서는 2005년 11월 처음으로 식용란의 미생물 및 잔류물질의 검사요령(농림부 고시 제 2005- 78)’이 제정되어 2006년 1월부터 본격적인 잔류물질의 검사가 시행되었는데, 식용란의 잔류물질 검사대상 약제성분으로 엔로플록사신과 옥시테트라싸이클린 2종을 지정하고 있다(2). 이외에 플루벤다졸은 벤지미다졸계 구충제에 속하는 것으로 인체내로 잔류이행 시 기형 및 면역체계에 이상을 일으키는 것으로 알려져 있어 계란에 대하여 국내를 비롯한 세계 여러나라에서 규제대상으로 삼고 있다(3, 4).

현재까지의 잔류물질분석법에 대한 국내연구는 근육이나 간장 등의 식육에 편향되어 있어, 계란과 같은 식용란을 대상으로 한 분석법 연구는 매우 미흡한 실정이며, 일부 계란에 대한 동시분석법의 연구도 특성이 유사한 동일 계열에 대한 약제에 대한 것들로서, 물리․이화학적 특성이 다른 약제들 간의 동시분석법은 아직까지 보고된 바가 없다. 계란 중 동시다성분분석법에 관한 국내연구들로는 간이 액액분배법(Liquid-Liquid Extrac- tion)과 HPLC-UV를 이용하여 계란 중의 6종 벤지미다졸계 구충제에 대한 동시분석법을 임 등(4)과 강 등(5)이 보고하였고, MSPD(Matrix Solid Phase Dispersion)추출법과 HPLC-UV를 이용하여 계란 중 4종 테트라싸이클린계 항생물질을 분석한 동시분석법을 윤 등(6)이 발표하였다. 서 등(7)이 MSPD 추출법과 HPLC-FLD를 이용하여 계란내 4종의 플루오로퀴놀론계 합성항균제 동시분석법을 보고한 이후, 심 등(8)이 4종의 플루오로퀴놀론계 항균제들을 SPE(Supercritical Fluid Extraction)법으로 추출하여 HPLC-FLD(Fluo- rescene Detector)를 이용하여 분석법을 보고하였으며, 최근에는 간이 액액분배 추출법과 HPLC- FLD를 이용한 계란 중 7종의 플루오로퀴놀론계 합성항균제들에 대한 분석법을 고 등(9)이 보고 하였다. HPLC-MSD를 이용한 식육 등의 잔류물질분석법은 국내에서는 연구가 매우 미미한 실정으로 계란을 대상으로는 아직까지 보고 된 바가 없으나 외국에서는 엔로플록사신을 포함한 플루오로퀴놀론계에 대한 연구가 보고되고 있는데, Lolo 등(10)은 계란 중 엔로플록사신과 그 대사산물인 시프로플록사신을 diphasic dialysis법으로 추출후 HPLC-MSD를 이용하여 분석하였으며, Sch- neider 등(11)은 계란을 대상으로 간이 액액분배 추출법과 HPLC-MSD를 이용하여 8종의 플루오로퀴놀론계에 대한 분석법을 보고하였다.

현행의 식품의약품안전청의 식품공전(3)이나 수의과학검역원의 잔류물질분석편람(12) 등의 국내 분석법 상 엔로플록사신은 형광에 반응하는 작용기 구조를 가지고 있어 형광검출기로 분석하게 되어있으며 UV검출기에 반응하는 감도가 매우 낮은 반면에 옥시테트라싸이클린과 플루벤다졸은 각각 360과 295 nm의 서로 다른 파장에서 UV검출기로 검출하도록 되어 있다. 따라서 계란 중의 옥시테트라싸이클린, 엔로플록사신 그리고 플루벤다졸을 분석하기 위해서는 각각 서로 다른 전처리과정과 분석검출기 및 UV분석파장을 달리해야하므로 검사에 소요되는 시간과 인력이 2~3배로 드는 단점이 있다. 따라서 본 연구는 식용란 중 계란을 대상으로 하여 분석법이 다른 3종 약제에 대하여 동시에 분석할 수 있는 추출 및 정제방법을 모색하고 HPLC-MSD를 이용한 신속하고도 정확한 다중검사법을 개발함으로서 항균제 오․남용된 식용란의 유통을 효과적으로 차단하기 위한 목적으로 수행되었다.

재료 및 방법

1. 재료

시중에 유통되고 있는 계란을 구입하여 예비실험을 통해 검사대상인 약제가 잔류되지 않은 계란을 시료로 사용하였다.

2. 시약 및 기구

1) 표준품

실험에 사용된 옥시테트라싸이클린(Sigma, USA), 플루벤다졸(Wako, Japan) 그리고 엔로플록사신(Fluka, Swiss) 제품의 순도는 모두 98% 이상이었다.

각 표준품들은 10～20 mg을 정확히 재어 100 mL 용량플라스크에 정용하여 100～200 µg/g의 농도로 조제하고 이를 4℃이하 냉장고에 보관하여 필요시마다 꺼내 상온에서 희석하여 사용하였다. 옥시테트라싸이클린과 엔로플록사신은 10 mL methanol로 녹인 뒤 증류수로 정용하였으나 플루벤다졸은 물과 methanol로도 잘 녹지 않아 10 mL 증류수와 이동상인 0.1% 초산함유 aceto- nitrile 90 mL 를 넣고 초음파로 10분간 용해하여 30 µg/g 농도로 조제하였다.

2) 시약 및 SPE

추출과 정제에 사용된 acetonitrile과 methanol (Merck, Germany)은 HPLC분석용으로 ethyl acetate와 dicloromethane(Wako, Japan)은 잔류분석용 300으로 증류수는 비저항계수 18 MΩ 이상의 초순수를 바로 제조한 것으로 사용하였으며, 이동상 용매로 조제 후에는 공기제거 필터한 뒤에 사용하였다. 용매에 첨가한 acetic acid (Kanto, Japan)와 기타 무기시약 등은 모두 특급 이상을 사용하였다. MSPD법의 추출을 위해 octadecyl C18(40 µm prep LC packing, JT Baker, USA)이 사용되었으며, 50 mL 원심튜브 (Falcon, USA) 그리고 HPLC-MSD 분석 전에 최종 추출물의 필터로는 0.2 µm Filter(Acrodisc 13 CR PTFE, Germany)를 사용하였다.

3. 분석기기

실험에서 사용한 분석기기는 HPLC-Mass Spectrometer(Hewlett Packard 1100 series, USA), 질소농축기(Organomation Associates, USA), 진공펌프(Waters, USA), 원심분리기(Allegra X-22R, Beckman, Germany), SPE vaccum manifolder(Supelco, USA) 및 vortex mixer(Maxi Mix II, Branstead Thermolyne , USA) 등을 사용하였으며, 대상 약제들의 측정을 위한 분석기기의 조건은 표 1과 같다.

4. 실험방법

1) 분리용 컬럼 및 이동상 조건 선정실험

약제들의 동시분석을 위하여 혼합액을 조제한 뒤, 각각의 성분들이 분리되는 최적조건을 선정하기위하여 국립수의과학검역원의 8종 합성항균제 동시분석법에서 사용된 ODS 80 Tm 컬럼과 본 실험실에서 가장 많이 사용하는 Water사의 Symmentry C18  컬럼 그리고 수용성 및 지용성비타민 동시분석 시에 우수한 것으로 보고된 MetaChem Polasis C18-A 등 컬럼 3종을 비교하였다. 이때 이동상으로는 김(13)에 의해 보고된 항균제 다중분석시 이동상 용매비교실험을 통하여 가장 적합하였다는 acetonitrile과 물을 사용하였고, 여기에 LC-MSD 분석에서 buffer로서 많이 첨가되는 0.1% acetic acid로 각각 조제하여 기울기용리법으로 acetonitrile의 농도를 0~50%로 변경해가면서 HPLC-MS API/ES 상에서 scan 모드로 각각 peak 들의 분리정도를 비교 실험하였다.

2) HPLC-MSD 최적분석조건 선정실험

LC-MS/API-ES 분석시 최적 분석감도를 얻기위하여 각각의 약제들을 FIA(flow injection analysis)방법을 이용하여 MSD의 설정인자인 fragment voltage, drying gas flow, nebulizer pressure, drying gas temperature, capillary voltage 등을 변화시켜가며 측정감도를 비교하였다. 약제들의 HPLC-MSD 분석의 정성과 정량을 위한 모분자 이온과 fragment ion들의 질량값을 구하였으며, 최종적으로 선정된 컬럼과 이동상의 조건에서 scan과 SIM 모드로 정성 및 정량을 위한 동시분석의 최적조건을 설정하였다.

3) 추출 및 정제실험

Table 1. Analytical condition of HPLC-MSD for antimicrobials
Items	Analytical condition
Instrument	Hewlett Packard 1100 MSD series(Ionization type : API/ESI)
Column	Symmetry C18(4.6×150 mm, 5 ㎛), Column temp. : 30℃
Mobile phase	H2O with 0.1% Acetic acid(A), ACN with 0.1% Acetic acid(B)
	Flow: 0.7 mL/min(gradient mode)
		Time(min)	A(%)	B(%)
		0	100	0
		3	100	0
		5	90	10
		9	80	20
		15	80	20
		20	50	50
		30	50	50
		Post time 10 min
Ionization mode	API/ES Positive
Drying gas flow	13 mL/min
Drying gas temp.	350℃
Nebulizer pressure	40 psi
Capillary voltage	4000 V

식용란 중의 항균제들을 동시에 추출 및 정제하기 위하여 합성항균제분석에서 간편한 추출법으로 많이 사용되고 있는 MSPD법(matrix solid phase dispersion)과 간이 액액분배법(liquidliquid ext- raction)을 비교시험하였다. MSPD법으로는 4종의 플루오로퀴놀론계 분석에 사용한 서 등(7)의 방법과 4종의 테트라싸이클린계 분석에 사용한 윤 등(6)이 보고한 방법들을 각각 적용하였으며, 간이 액액분배법으로는 7종의 플루오로퀴놀론계 분석에 사용한 고 등(9)의 방법과 6종 벤지미다졸계 구충제 동시분석에 사용한 임 등(4)의 방법을 적용하였다.

4) 합성항균제들의 회수율 실험

본 실험에서 얻어진 동시전처리 방법들을 이용하여 계란 중의 검출한계를 구하기 위하여 각 약제들의 농도를 5 µg/g에서 부터 1/5배로 단계적으로 희석하여 10단계로 조제한 뒤 바로 추출 정제하여 SIM mode로 분석하였으며, S/N비가 3～4 이상인 농도를 검출한계로 정하였다. 또 전란액에 표준 약제들을 각각 1 µg/g 수준으로 3반복 첨가하고 전란액에 충분히 흡수가 되도록 잘 섞어 준 뒤 밀봉하여 하룻밤을 방치한 뒤 이를 MSPD법과 동시전처리방법을 이용하여 추출 및 정제를 하고, HPLC-MSD/ES SIM mode 상에서 회수율을 측정하였는데, 그 실험과정은 그림 1과 같다.

결과 및 고찰

1) 분리용 컬럼 및 이동상 조건 선정실험

약제들의 동시분석을 위한 혼합액조제와 각 성분의 최적분리조건을 선정하기 위하여 우수하다고 시험보고된 3종의 컬럼을 비교 실험한 결과 Symmetry C18 컬럼이 분리도와 피크의 모양이 양호하게 나타났다. 이동상으로는 0.1% 초산을 함유시킨 물과 acetonitrile을 사용하였으며, ace- tonitrile의 농도를 0에서 50%까지 기울기 용리법으로 변경해가면서 HPLC-MS API/ES에서 scan 모드로 각각 peak들을 양호하게 분리시킬 수가 있었다. 이동상으로는 사용된 acetonitrile과 물에 0.1% 초산을 첨가한 조건에서 pH는 약 3.5 수준의 조건이었으며, 이동상의 용리조건(표 1)에서 분리된 약제들의 크로마토그램은 그림 2와 같다.

2) HPLC-MSD 최적분석조건 선정실험

LC-MS API/ES 분석시 최적감도를 얻기 위하여 각각의 약제들을 FIA 방법을 이용하여 MSD의 설정인자를 변경하여 가면서 비교실험하였는데, 최적값으로 drying gas flow가 13 mL/min, drying gas temperature가 350℃, nebulizer pressure가 40 psi, 그리고 capillary voltage가 4000 V 일 때 최적감도를 얻을 수가 있었다.

합성항균제들의 측정감도에 가장 큰 영향을 미치는 것은 fragment voltage로 80~120 V의 영역으로 나타났으며, 그 최적값은 옥시테트싸이클린이 80 V였고, 엔로플록사신과 플루벤다졸은 모두가 100 V에서 최적의 이온화된 mass(m/z) 값을 나타내었다. 각각의 약제들의 LC-MS 분석시 최적감도를 나타낸 조각이온화전압과 정성과 정량을 위한 fragment ion들의 질량값을 구하였다(표 2).

0.5 g whole egg+ 2 g C18 powder

↓

Adding 0.05 g EDTA & oxalic acid

↓

Blending gently in glass pestal

↓

Transferring to 12 mL reservoir

↓

Rinsing with 8 mL hexane

↓

Rinsing with 8 mL dichloromethane

↓

Elution with 13 mL methanolic acid

↓

Evaporating at 40℃ water bath

with nitrogen stream

↓

Resolving with 1 mL mobile phase

↓

Filtering with 0.2 ㎛ PTFE filter

↓

Analysis with HPLC-MSD

MSPD method

0.5 g whole egg in 50 mL tube

↓

Adding 1 mL 10% oxalic acid and

mixing 10 min on vortex mixer

↓

Adding 5 mL ACN : Ethyl acetate(2:1) sol'n

↓

Mixing 10 min on high vortex mixer

↓

Centrifuging 4000 rpm, 10 min at 4℃

↓

Repeating extraction with 5 mL ACN : Ethyl acetate(2:1) sol'n

↓

Transferring extracted sol'n to new 15 mL tube

↓

Evaporating at 40℃ water bath

with nitrogen stream

↓

Resolving with 1 mL mobile phase

↓

Filtering with 0.2 ㎛ PTFE filter

↓

Analysis with HPLC-MSD

LLE method

Fig. 1. Flow diagrams of MSPD(matrix solid phase dispersion) and LLE(liquid-liquid extraction) method for analysis of antimicrobials in eggs.

3) 추출 및 정제방법 선정 실험

약제의 물리화학적 특성이 서로 다르기 때문에 계란 중의 잔류약제들을 동시분석하기 위해서는 전처리시 시료에서 약제성분들을 완전히 추출해낼 수 있는 추출용매와 아울러 기기분석시에 간섭을 배제할 수 있는 정제과정이 매우 중요하다. HPLC-MSD에 적용할 수 있는 적합한 전처리방법을 선정하기위하여 플로로퀴놀계와 테트라싸이클린계 그리고 벤지미다졸계 동시분석법에서 사용된 MSPD법과 액체-액체분배법(LLE법)을 이용하여 HPLC-MSD 동시분석을 위한 전처리방법으로서의 적용성을 시험하였다. MSPD법은 컬럼충진물로 많이 사용되는 옥타데실(C18)을 시료와 혼합하여 반 건조상태로 한 뒤 유기용매로 직접 용출하는 방법으로 시료와 혼합시 분쇄되는 기계적인 힘과 C18의 소수성으로 인하여 지방이나 비극성 물질은 달라붙게 되며 단백질이나 극성물질은 C18 말단으로 배척이 되는 점을 이용한 전처리법인데 시료의 양에 제한을 받는 단점이 있지만 다수의 시료를 신속하게 처리할 수 있는 방법이다. 반면에 간이 LLE법은 분액깔대기를 이용한 유기물질 추출정제에서 기본방법인 분액깔대기를 이용한 액체-액체 분배법(liquid-liquid extraction)을 50 mL 튜브내에서 소량의 시료와 추출용매의 사용으로 간이화한 것으로 유기용매를 이용하여 시료중의 비극성인 지방과 합성항균제를 추출하고 이를 hexane과 water(또는 acetonitrile이나 metha- nol 등)의 분배를 통하여 지용성물질을 haxane층으로 옮겨 제거시킨 뒤 농축하여 그대로 또는 SPE 등의 정제 후 분석하는 방법인데 기존의 액액분배법에 비교할 때 간섭물질 제거와 정확도에 제한을 받는 단점이 있지만 용매의 사용이나 추출 및 농축시간들에 있어서 크게 단축이 되어 다수의 시료를 신속하게 처리할 수 있는 방법이다.

Fig. 2. Chromatograms obtained on SIM mode of HPLC-MSD for antimicrobials with symmetry C18 column.

Table 2. Parameters of HPLC-MSD/ESI analysis for antimicrobials
Compound	Molecular formular	Molecular weight	Polarity type	Optimized fragment voltage(V)	Quantification ion (m/z)	Confirmationion (m/z)
Enrofloxacin	C19H22FN3O3	359.4	+	100	360	342,316
Oxytetracycline	C22H24N2O9	460.5	+	80	461	443, 426
Flubendazole	C12H15N3O2S	313.3	+	100	314	282

그 결과 MSPD법에서는 서 등(7)의 방법이 플루벤다졸에서의 낮은 추출율을 보였으나 윤 등(6)의 방법에서는 3종이 모두 추출되었고, 간이 액액분배법에서는 임 등(4)의 방법이 옥시테트라싸이클린을 추출해 내지 못하였으나 고 등(9)의 방법은 3종 모두를 추출해 낼 수 있었다. 선정된 MSPD법과 간이 액액분배법을 비교하면 액액분배법이 엔로플록사신에서 다소 낮은 추출율을 보였으나, 두 방법 모두 HPLC-MSD분석시의 전처리법으로서 사용할 수 있는 것으로 판단되었으며 실험상의 용이성은 간이 액액분배법이 좀 더 용이하였다.

4) 회수율실험

전란액에 각각 1 µg/g 수준으로 첨가시킨 표준약제들을 시험에서 선정된 MSPD법과 간이 액액분배(LLE)법들을 이용하여 추출 및 정제하고, HPLC-MSD/ES SIM mode 상에서 회수율을 측정한 결과는 표 3과 같다.

Table 3. Detection limits and recoveries of antimicrobials in eggs on analytical conditions by HPLC-MSD
Compound	Recoverys from eggs(%)						Detection Limit(㎍/g)	MRL3)(㎍/g)
	MSPD1)			LLE2)
Enrofloxacin		95.5 ± 4.24)			72.1 ± 8.4		0.01	not dectected
Oxytetracycline		128.2 ± 4.1			100.4 ± 2.3		0.01	0.2
Flubendazole		89.7 ± 3.2			93.5 ± 2.1		0.005	0.4
1) matrix solid phase dispersion. 2) liquid-liquid extraction. 3) maximum residue limit. 4) mean±sd(n=3).

계란에서의 회수율은 엔로플록사신의 경우 MSPD법이 우수하였으나 옥시테트라싸이클린의 경우는 간이 액액분배법이 보다 더 우수하였다. 첨가 약제별 검출한계를 보면 플루벤다졸이 0.005 µg/g로 가장 우수하였으며 엔로플록사신과 테트라싸이클린은 0.01 µg/g로 나타났는데, 이는 최대잔류허용기준(maximum residue limit, MRL)값보다 10배 이상 낮았으며 엔로플록사신의 경우 불검출이지만 닭고기에서의 기준이 0.1 µg/g에 비교해서 볼 때 충분히 이용 가능한 수준이었다.

두 방법 모두 약제성분의 검출에 방해되는 계란의 매트릭스에 의한 간섭은 발견되지 않았으나 옥시테트라싸이클린(14.5분)과 플루벤다졸(27.3분) 두 약제의 검출피크들의 사이에서(24.1분), 전처리 시 옥소린산의 첨가에서 기인된 것으로 추정된 일정한 피크가 검출되었으며 약제성분의 피크와는 확연히 분리되어 약제들의 분석 상에 별다른 영향을 끼치지 않았다.

회수율 실험 결과 두 전처리방법 모두에서 약 70~130%의 범위를 나타내어 두 방법 모두 3종 약제에 대한 HPLC-MSD 동시분석법으로 모두 활용이 가능한 것으로 사료되었다(표 3).

이상의 결과로 HPLC-MSD를 이용한 본 분석법은 3종의 약제들을 동일한 전처리 과정을 거쳐서 30분이내의 분석시간에 동시분석 할 수 있었으며, 분석 시 시료상의 간섭도 보이지 않아 분석법으로서 활용이 가능하였는데, 이를 이용할 시 기존의 개별 분석법을 이용할 때에 비하여 시간 및 인력의 절감효과가 있는 것으로 사료된다.

결  론

본 연구는 식용란 중 계란을 대상으로 “식용란의 미생물 및 잔류물질 검사요령(농림부 고시 2005 -78)” 상의 규정검사 잔류물질인 엔로플록사신과 옥시테크라싸이클린 2종과 기준 설정항목인 플루벤다졸을 포함한 3종 약제에 대하여 HPLC-MSD 로 검출 및 정량할 수 있는 동시분석법 개발을 위한 목적으로 수행하여 다음과 같은 결과를 얻었다.

1.  약제들의 성분별 분리를 위하여 3종의 컬럼을 비교한 결과 symmetry C18의 분리도와 피크양상이 가장 양호하게 나타났고, 0.1% acetic acid를 각각 함유시킨 물과 acetoni- trile을 조합한 기울기용리방법으로 30분 이내의 시간에 3종 약제 성분들을 양호하게 분리시킬 수가 있었다.

2.  HPLC-MSD API/ES mode상에서 FIA분석을 통해 각 약제 성분들의 최적감도를 얻기 위한 MSD 분석 파라메타들의 최적값은 drying gas flow는 13 mL/min, drying gas temperature는 350℃, nebulizer pressure로는 40 psi, 그리고 capillary voltage는 4,000 V였다.

3.  합성항균제들의 측정감도에 가장 큰 영향을 미치는 것은 fragment voltage로 옥시테트싸이클린은 80 V였고, 엔로플록사신과 플루벤다졸은 100 V에서 최적의 이온화된 mass (m/z) 값을 나타내었으며, 약제들의 HPLC- MSD 분석시 최적감도를 나타낸 이온화전압과 정성과 정량을 위한 각각의 fragment ion들의 질량값을 구하였다.

4.  HPLC-MSD에 적용할 수 있는 적합한 전처리방법을 선정하기 위하여 MSPD법과 간이 액액분배법을 이용하여 비교하였는데 엔로플록사신의 경우 MSPD법이 우수하였으나 옥시테트라 싸이클린의 경우는 간이 액액분배법이 더 우수하였다.

5. 계란에 첨가 약제별 검출한계를 보면 플루벤다졸이 0.005 µg/g로 가장 우수하였으며, 계란의 매트릭스에 의한 간섭은 발견되지 않았다. 3종 약제를 계란에 흡수시킨 뒤 선정된 MSPD법과 간이 액액분배법으로서의 회수율 실험 결과 70~130%의 범위를 나타내어 두 전처리 방법 모두 3종 약제에 대한 HPLC- MSD 동시분석법으로 활용이 가능한 것으로 사료되었다.

참고문헌

1. 박우문, 이희애, 최원희, 전기홍, 유익종 : 특수란에 대한 소비자 기호도조사. 한국축산식품학회지, 20(3):242～248, 2000.

2. 농림부 : 식용란의 미생물 및 잔류물질 등 검사요령 : 농림부고시 제 2005-78호, 2005.

3. 식품의약품안전청 : 식품공전 ; 59~69, 2005.

4.  임채미, 윤소미, 조병훈, 박준조, 김문배, 손성완, 박종명 : HPLC/UV를 이용한 계란내 벤지미다졸계 구충제의 동시다제 분석. 한국수의공중보건학회지, 27(4):199~204, 2003.

5.  강형주, 김문배, 이재봉, 김봉식, 김영갑 : 식용란 중 벤지미다졸계 구충제 분석. 한국가축위생학회지, 26(2):157～162, 2003.

6.  윤소미, 임채미, 조병훈, 박준조, 박은정, 손성완 : 액체크로마토그래피를 이용한 계란내 테트라싸이클린계약물의 동시다제분석. 한국수의공중보건학회지, 27(4):171～176, 2003.

7.  서계원, 이재일, 이채용, 김은선, 이정치 : MSPD법과 HPLC를 이용한 계란내 플루오로퀴놀론계 항균물질의 동시다성분 정량분석. 한국수의공중보건학회지,  26(4):269~281, 2002.

8. Shim JH, Lee MH, Kim MR, Lee CJ and Kim IS : Simultaneous measurement of fluoroquinolones in eggs by a combi- nation of supercritical fluid extraction and high pressure liquid chroma- tography. J.Biosci. Biotechnol. Biochem., 67(6):1342~1348, 2003.

9.  고바라다, 박성도, 장미선, 나호명, 김용환 : 식용란의 플루오로퀴놀론계 합성항균제의 잔류에 대한 조사. 한국가축위생학회지, 28(3): 235~243, 2005.

10.  LoLo M, Pedrerira C, Fente C, Vazquez BI, Franco CM and Cepeda A : Study of enrofloxacin depletion in the eggs of laying hens using diphasic dialysis extraction/purification and determinative HPLC-MS analysis. J. Agric. Food Chem., 53:2849~2852, 2005.

11.  Schneider MJ and Donoghue DJ : Multiresidue determination of fluoro- quinolone antibiotics in eggs using liquid chromatography-florescence-Mass spectrometry. J. Analytica. Chemica. Acta., 483:39~49, 2003.

12.  국립수의과학검역원 : 축산물 중 유해물질 분석법 편람, 2006.

13.  김달호 : 액체크로마토그래피 이온 트랩 질량분석법을 이용한 합성항균제의 분석. 연세대학교 대학원 박사학위논문, p1~156, 2002.