PCR 수행 및 결과 기록지

실험일자

2014. 5. 13.

시   료

분변 5건, 깃털 5건

(세부내역 결과 참조)

목    적

조류 보나바이러스 (avian bornavirus) 검출

시     약

설  명

단위량

(㎕)

one step RT-PCR 조건

Process

℃

Time

Cycles

Template

추출 RNA

2

Reverse transcription reaction

45

30 min

Primer

ABV-Foward

1

Inactivation of RTase

94

5 min

Primer

ABV-Reverse

1

Denaturation

94

30 sec

× 40

Polymerase

i-star Taq

-

Annealing

50

30 sec

ddH2O

16

Extension

72

30 sec

합계

20

Final extension

72

7 min

결     과

* RNA추출 : Viral Gene DNA/RNA extraction kit (인트론바이오)

* 전기영동 : 2% agarose gel / Midori green 6㎕ / 100V / 25min.

* 시료세부내역 및 결과(분변)

lane번호	사용 Primer	양성밴드 (시퀀싱결과)	동물명(동물번호)	시료(조직)	결과
1	BDV-M gene	327 bp	큰유황앵무(광돌)	분변	음성
2			큰유황앵무(멍이)		음성
3			시트론유황앵무(트론)		양성
4			큰유황앵무(번식장)		양성
5			야자앵무		양성
6	BDV-N gene	366 bp	큰유황앵무(광돌)	분변	음성
7			큰유황앵무(멍이)		음성
8			시트론유황앵무(트론)		양성
9			큰유황앵무(번식장)		음성
10			야자앵무		음성
11	ABV-L gene	511 bp	큰유황앵무(광돌)	분변	음성
12			큰유황앵무(멍이)		양성
13			시트론유황앵무(트론)		양성
14			큰유황앵무(번식장)		음성
15			야자앵무		음성
16	ABV-M gene	327 bp	큰유황앵무(광돌)	분변	음성
17			큰유황앵무(멍이)		음성
18			시트론유황앵무(트론)		양성
19			큰유황앵무(번식장)		양성
20			야자앵무		양성
21	ABV-N gene	372 bp	큰유황앵무(광돌)	분변	음성
22			큰유황앵무(멍이)		음성
23			시트론유황앵무(트론)		음성
24			큰유황앵무(번식장)		음성
25			야자앵무		-

* 전기영동 사진

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lane 1 ~ 24 : 시료

lane 0      : 100 bp ladder

결     과

* 시료세부내역 및 결과(깃털)

lane번호	사용 Primer	양성밴드 (시퀀싱결과)	동물명(동물번호)	시료(조직)	결과
1	BDV-M gene	327 bp	큰유황앵무(광돌)	깃털	음성
2			큰유황앵무(멍이)		음성
3			시트론유황앵무(트론)		음성
4			큰유황앵무(번식장)		음성
5			야자앵무		음성
6	BDV-N gene	366 bp	큰유황앵무(광돌)	깃털	음성
7			큰유황앵무(멍이)		음성
8			시트론유황앵무(트론)		음성
9			큰유황앵무(번식장)		음성
10			야자앵무		음성
11	ABV-L gene	511 bp	큰유황앵무(광돌)	깃털	음성
12			큰유황앵무(멍이)		음성
13			시트론유황앵무(트론)		양성
14			큰유황앵무(번식장)		음성
15			야자앵무		음성
16	ABV-M gene	327 bp	큰유황앵무(광돌)	깃털	양성
17			큰유황앵무(멍이)		양성
18			시트론유황앵무(트론0		양성
19			큰유황앵무(번식장)		음성
20			야자앵무		음성
21	ABV-N gene	372 bp	큰유황앵무(광돌)	깃털	음성
22			큰유황앵무(멍이)		음성
23			시트론유황앵무(트론)		음성
24			큰유황앵무(번식장)		음성
25			야자앵무		-

* 전기영동 사진

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lane 1 ~ 24 : 시료

lane 0       : 100 bp ladder