nested-PCR 수행 및 결과 기록지

실험일자

2015. 7. 6.

시   료

큰돌고래 3건

(세부내역 결과 참조)

목    적

개 홍역 바이러스 (Canine distemper virus) 검출

시     약

설  명

단위량

(㎕)

RT-PCR 조건

Process

℃

Time

Cycles

Template

시료 추출 RNA

2

Reverse transcription

45

30분

1

Primer

premix

-

Inactive RT

94

5분

Primer

-

Denaturation

94

30초

40

RNase free water

18

Anealing

50

30초

polymerase

OptiScript reverse transcriptase

-

Extension

72

40초

i-star Taq DNA polymerase

-

합계

20

Final Extension

72

5분

1

시     약

설  명

단위량

(㎕)

2nd PCR 조건

Process

℃

Time

Cycles

Template

RT-PCR 산물

1

Initial Denaturation

94

5분

1

Primer

premix

-

Denaturation

94

5초

30

Primer

-

Anealing

45

5초

RNase free water

-

19

Extension

72

15초

polymerase

i-star Taq

-

Extension

72

5분

1

합계

20

Preservation

4

∞

1

결     과

* RNA추출 : Viral Gene DNA/RNA extraction kit (인트론바이오)

* 전기영동 : 1.5% agarose/ 7㎕ / 100V / 30min.

* 시료세부내역 및 결과

lane	동물명	시료	결과
1	큰돌고래(금등)	혈액(whole blood)	음성
2	큰돌고래(대포)	혈액(whole blood)	음성
3	큰돌고래(태지)	혈액(whole blood)	음성

* 전기영동 사진 (양성 conrtol : 264 bp)

1     2     3     4     5

lane 1, 2, 3 : 시료

lane 4 : 100 bp ladder

lane 5 : positive control