PCR 수행 및 결과 기록지

실험일자

2014. 11. 17.

시   료

청금강 분변

(세부내역 결과 참조)

목    적

조류 보나바이러스 (avian bornavirus) 검출

시     약

설  명

단위량

(㎕)

one step RT-PCR 조건

Process

℃

Time

Cycles

Template

조직추출 RNA

2

Reverse transcription reaction

45

30 min

Primer

ABV-Foward

1

Inactivation of RTase

94

5 min

Primer

ABV-Reward

1

Denaturation

94

30 sec

× 40

Polymerase

i-star Taq

-

Annealing

50

30 sec

ddH2O

16

Extension

72

30 sec

합계

20

Final extension

72

7 min

결     과

* RNA추출 : Viral Gene DNA/RNA extraction kit (인트론바이오)

* 전기영동 : 2% agarose gel / Midori green 6㎕ / 100V / 22min.

* 시료세부내역 및 결과

lane번호	사용 Primer	양성밴드 (시퀀싱결과)	동물명(동물번호)	시료(조직)	결과
1,8	BDV-M gene	327 bp	청금강 1,2	뇌	음성
2,9	BDV-N gene	366 bp	청금강 1,2	뇌	음성
3,10	ABV-L gene	511 bp	청금강 1,2	뇌	음성
4,11	ABV-M gene	327 bp	청금강 1,2	뇌	음성
5,12	ABV-N gene	372 bp	청금강 1,2	뇌	음성

* 전기영동 사진

1    2    3    4    5    6    7    8    9    10   11   12

lane 1~5, 8~12 : 시료

lane 6           : 100bp ladder

lane 7           : Negative control