PCR 수행 및 결과 기록지

실험일자

2016. 9. 19.

동물명

몽크앵무 20수

(세부내역 결과 참조)

목    적

조류 보나바이러스 (avian bornavirus) 검출

시     약

설  명

단위량

(㎕)

one step RT-PCR 조건

Process

℃

Time

Cycles

Template

조직추출 RNA

2

Reverse transcription reaction

45

30 min

Primer

ABV-Foward

1

Inactivation of RTase

94

5 min

Primer

ABV-Reverse

1

Denaturation

94

30 sec

× 40

Polymerase

i-star Taq

-

Annealing

50

30 sec

ddH2O

16

Extension

72

30 sec

합계

20

Final extension

72

7 min

결     과

* RNA추출 : Viral Gene DNA/RNA extraction kit (인트론바이오)

* 전기영동 : 1.5% agarose gel / Midori green 6㎕ / 100V / 35min.

* 시료세부내역 및 결과(1~4)

lane번호	사용 Primer	양성밴드 (시퀀싱결과)	동물명	동물번호	시료(조직)	결과
1	BDV-M gene	327 bp	몽크앵무	B12-1-12-116	총배설강swab	음성
2	BDV-N gene	366 bp	〃	〃	〃	음성
3	ABV-L gene	511 bp	〃	〃	〃	음성
4	ABV-M gene	327 bp	〃	〃	〃	음성
5	ABV-N gene	372 bp	〃	〃	〃	음성
6	BDV-M gene	327 bp	몽크앵무	B12-1-12-119	총배설강swab	음성
7	BDV-N gene	366 bp	〃	〃	〃	음성
8	ABV-L gene	511 bp	〃	〃	〃	음성
9	ABV-M gene	327 bp	〃	〃	〃	음성
10	ABV-N gene	372 bp	〃	〃	〃	음성
11	BDV-M gene	327 bp	몽크앵무	B12-1-12-118	총배설강swab	음성
12	BDV-N gene	366 bp	〃	〃	〃	음성
13	ABV-L gene	511 bp	〃	〃	〃	양성
14	ABV-M gene	327 bp	〃	〃	〃	음성
15	ABV-N gene	372 bp	〃	〃	〃	음성
16	BDV-M gene	327 bp	몽크앵무	B12-1-12-115	총배설강swab	음성
17	BDV-N gene	366 bp	〃	〃	〃	음성
18	ABV-L gene	511 bp	〃	〃	〃	음성
19	ABV-M gene	327 bp	〃	〃	〃	음성
20	ABV-N gene	372 bp	〃	〃	〃	음성

결 과	* 전기영동 사진(1~4) 1 2 3 4 5 (L) 6 7 8 9 10 (L) 11 12 13 14 15 (L) 16 17 18 19 20 lane 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 : 시료 (L) : 100 bp ladder

결     과

* 시료세부내역 및 결과(5~8)

lane번호	사용 Primer	양성밴드 (시퀀싱결과)	동물명	동물번호	시료(조직)	결과
1	BDV-M gene	327 bp	몽크앵무	B12-1-12-117	총배설강swab	음성
2	BDV-N gene	366 bp	〃	-	〃	음성
3	ABV-L gene	511 bp	〃	-	〃	음성
4	ABV-M gene	327 bp	〃	-	〃	음성
5	ABV-N gene	372 bp	〃	-	〃	음성
6	BDV-M gene	327 bp	몽크앵무	B12-1-12-120	총배설강swab	음성
7	BDV-N gene	366 bp	〃	〃	〃	음성
8	ABV-L gene	511 bp	〃	〃	〃	음성
9	ABV-M gene	327 bp	〃	〃	〃	음성
10	ABV-N gene	372 bp	〃	〃	〃	음성
11	BDV-M gene	327 bp	몽크앵무	B12-1-12-124	총배설강swab	음성
12	BDV-N gene	366 bp	〃	〃	〃	음성
13	ABV-L gene	511 bp	〃	〃	〃	음성
14	ABV-M gene	327 bp	〃	〃	〃	음성
15	ABV-N gene	372 bp	〃	〃	〃	음성
16	BDV-M gene	327 bp	몽크앵무	B12-1-12-123	총배설강swab	음성
17	BDV-N gene	366 bp	〃	〃	〃	음성
18	ABV-L gene	511 bp	〃	〃	〃	음성
19	ABV-M gene	327 bp	〃	〃	〃	음성
20	ABV-N gene	372 bp	〃	〃	〃	음성

결 과	* 전기영동 사진(5~8) 1 2 3 4 5 (L) 6 7 8 9 10 (L) 11 12 13 14 15 (L) 16 17 18 19 20 lane 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 : 시료 (L) : 100 bp ladder

결     과

* 시료세부내역 및 결과(9~10)

lane번호	사용 Primer	양성밴드 (시퀀싱결과)	동물명	동물번호	시료(조직)	결과
1	BDV-M gene	327 bp	몽크앵무	B12-1-12-122	총배설강swab	음성
2	BDV-N gene	366 bp	〃	-	〃	음성
3	ABV-L gene	511 bp	〃	-	〃	음성
4	ABV-M gene	327 bp	〃	-	〃	음성
5	ABV-N gene	372 bp	〃	-	〃	음성
6	BDV-M gene	327 bp	몽크앵무	B12-1-12-121	총배설강swab	음성
7	BDV-N gene	366 bp	〃	〃	〃	음성
8	ABV-L gene	511 bp	〃	〃	〃	음성
9	ABV-M gene	327 bp	〃	〃	〃	음성
10	ABV-N gene	372 bp	〃	〃	〃	음성

결 과	* 전기영동 사진(9~10) 1 2 3 4 5 (L) 6 7 8 9 10 (L) ------ (P) ----- (L) ------ (N) ------ lane 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 : 시료 (L) : 100 bp ladder (P) : Positive control (N) : Negative control

결     과

* 시료세부내역 및 결과(11~14)

lane번호	사용 Primer	양성밴드 (시퀀싱결과)	동물명	동물번호	시료(조직)	결과
1	BDV-M gene	327 bp	몽크앵무	B12-1-12-129	총배설강swab	음성
2	BDV-N gene	366 bp	〃	-	〃	음성
3	ABV-L gene	511 bp	〃	-	〃	음성
4	ABV-M gene	327 bp	〃	-	〃	음성
5	ABV-N gene	372 bp	〃	-	〃	음성
6	BDV-M gene	327 bp	몽크앵무	B12-1-12-127	총배설강swab	음성
7	BDV-N gene	366 bp	〃	〃	〃	음성
8	ABV-L gene	511 bp	〃	〃	〃	음성
9	ABV-M gene	327 bp	〃	〃	〃	음성
10	ABV-N gene	372 bp	〃	〃	〃	음성
11	BDV-M gene	327 bp	몽크앵무	B12-1-12-128	총배설강swab	음성
12	BDV-N gene	366 bp	〃	〃	〃	양성
13	ABV-L gene	511 bp	〃	〃	〃	양성
14	ABV-M gene	327 bp	〃	〃	〃	음성
15	ABV-N gene	372 bp	〃	〃	〃	음성
16	BDV-M gene	327 bp	몽크앵무	B12-1-12-126	총배설강swab	음성
17	BDV-N gene	366 bp	〃	〃	〃	음성
18	ABV-L gene	511 bp	〃	〃	〃	음성
19	ABV-M gene	327 bp	〃	〃	〃	음성
20	ABV-N gene	372 bp	〃	〃	〃	음성

결 과	* 전기영동 사진(11~14) (L) 1 2 3 4 5 (L) 6 7 8 9 10 (L) 11 12 13 14 15 (L) 16 17 18 19 20 lane 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 : 시료 (L) : 100 bp ladder

결     과

* 시료세부내역 및 결과(15~18)

lane번호	사용 Primer	양성밴드 (시퀀싱결과)	동물명	동물번호	시료(조직)	결과
1	BDV-M gene	327 bp	몽크앵무	B12-1-12-125	총배설강swab	음성
2	BDV-N gene	366 bp	〃	-	〃	음성
3	ABV-L gene	511 bp	〃	-	〃	음성
4	ABV-M gene	327 bp	〃	-	〃	음성
5	ABV-N gene	372 bp	〃	-	〃	음성
6	BDV-M gene	327 bp	몽크앵무	B12-1-12-132	총배설강swab	음성
7	BDV-N gene	366 bp	〃	〃	〃	음성
8	ABV-L gene	511 bp	〃	〃	〃	음성
9	ABV-M gene	327 bp	〃	〃	〃	음성
10	ABV-N gene	372 bp	〃	〃	〃	음성
11	BDV-M gene	327 bp	몽크앵무	B12-1-12-133	총배설강swab	음성
12	BDV-N gene	366 bp	〃	〃	〃	음성
13	ABV-L gene	511 bp	〃	〃	〃	음성
14	ABV-M gene	327 bp	〃	〃	〃	음성
15	ABV-N gene	372 bp	〃	〃	〃	음성
16	BDV-M gene	327 bp	몽크앵무	B12-1-12-31	총배설강swab	음성
17	BDV-N gene	366 bp	〃	〃	〃	음성
18	ABV-L gene	511 bp	〃	〃	〃	음성
19	ABV-M gene	327 bp	〃	〃	〃	음성
20	ABV-N gene	372 bp	〃	〃	〃	음성

결 과	* 전기영동 사진(15~18) (L) 1 2 3 4 5 (L) 6 7 8 9 10 (L) 11 12 13 14 15 (L) 16 17 18 19 20 lane 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 : 시료 (L) : 100 bp ladder

결     과

* 시료세부내역 및 결과(19~20)

lane번호	사용 Primer	양성밴드 (시퀀싱결과)	동물명	동물번호	시료(조직)	결과
1	BDV-M gene	327 bp	몽크앵무	B12-1-12-131	총배설강swab	음성
2	BDV-N gene	366 bp	〃	-	〃	음성
3	ABV-L gene	511 bp	〃	-	〃	음성
4	ABV-M gene	327 bp	〃	-	〃	음성
5	ABV-N gene	372 bp	〃	-	〃	음성
6	BDV-M gene	327 bp	몽크앵무	B12-1-12-130	총배설강swab	음성
7	BDV-N gene	366 bp	〃	〃	〃	음성
8	ABV-L gene	511 bp	〃	〃	〃	음성
9	ABV-M gene	327 bp	〃	〃	〃	음성
10	ABV-N gene	372 bp	〃	〃	〃	음성

결 과	* 전기영동 사진(19~20) (L) 1 2 3 4 5 (L) 6 7 8 9 10 (L) ------ (P) ----- (L) ------ (N) ------ lane 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, (L) : 100 bp ladder (P) : Positive control (N) : Negative control