PCR 수행 및 결과 기록지

실험일자

2016. 1. 5.

시   료

썬코뉴어 등 2수

(세부내역 결과 참조)

목    적

조류 보나바이러스 (avian bornavirus) 검출

시     약

설  명

단위량

(㎕)

one step RT-PCR 조건

Process

℃

Time

Cycles

Template

조직추출 RNA

2

Reverse transcription reaction

45

30 min

Primer

ABV-Foward

1

Inactivation of RTase

94

5 min

Primer

ABV-Reverse

1

Denaturation

94

30 sec

× 40

Polymerase

i-star Taq

-

Annealing

50

30 sec

ddH2O

16

Extension

72

30 sec

합계

20

Final extension

72

7 min

결     과

* RNA추출 : Viral Gene DNA/RNA extraction kit (인트론바이오)

* 전기영동 : 2% agarose gel / Midori green 6㎕ / 100V / 22min.

* 시료세부내역 및 결과(1)

lane번호	사용 Primer	양성밴드 (시퀀싱결과)	동물명(동물번호)	시료(조직)	결과
1	BDV-M gene	327 bp	썬코뉴어(1/4폐사)	뇌swab	양성
2	BDV-N gene	366 bp	〃	〃	양성
3	ABV-L gene	511 bp	〃	〃	양성
4	ABV-M gene	327 bp	〃	〃	양성
5	ABV-N gene	372 bp	〃	〃	양성
6	BDV-M gene	327 bp	썬코뉴어(1/4폐사)	전위swab	양성
7	BDV-N gene	366 bp	〃	〃	양성
8	ABV-L gene	511 bp	〃	〃	양성
9	ABV-M gene	327 bp	〃	〃	양성
10	ABV-N gene	372 bp	〃	〃	음성
11	BDV-M gene	327 bp	썬코뉴어(1/4폐사)	분변swab	양성
12	BDV-N gene	366 bp	〃	〃	음성
13	ABV-L gene	511 bp	〃	〃	음성
14	ABV-M gene	327 bp	〃	〃	양성
15	ABV-N gene	372 bp	〃	〃	음성

* 전기영동 사진

1   2   3   4   5   N   L   6   7   8    9   10   N   L   11  12  13  14  15   N

lane 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15  : 시료

N : negative control

L : 100 bp ladder

결     과

* 시료세부내역 및 결과

lane번호	사용 Primer	양성밴드 (시퀀싱결과)	동물명(동물번호)	시료(조직)	결과
1	BDV-M gene	327 bp	유황앵무(멍이)	분변	음성
2	BDV-N gene	366 bp	〃	〃	음성
3	ABV-L gene	511 bp	〃	〃	양성
4	ABV-M gene	327 bp	〃	〃	음성
5	ABV-N gene	372 bp	〃	〃	음성
6	BDV-M gene	327 bp	썬코뉴어(1/4폐사)	뇌조직	양성
7	BDV-N gene	366 bp	〃	〃	양성
8	ABV-L gene	511 bp	〃	〃	양성
9	ABV-M gene	327 bp	〃	〃	양성
10	ABV-N gene	372 bp	〃	〃	양성

* 전기영동 사진

1   2   3   4   5   N    L   6   7    8    9   10   N   L

lane 6, 7, 8, 9, 10 : 시료

lane 1, 2, 3, 4, 5 : Positive control(14.9.1 양성퍈정 유황앵무(멍이) 분변

N : negative control

L : 100 bp ladder