식품의약품안전처 공고 제2014-239호

축산물의 가공기준 및 성분규격

일부개정고시(안) 행정예고

2014. 8. 18.

식품의약품안전처

식품의약품안전처 공고 제2014-239호

｢축산물 위생관리법｣ 제4조제2항의 규정에 따라 ｢축산물의 가공기준 및 성분규격｣을 다음과 같이 개정함에 있어 개정의 취지와 내용을 국민에게 미리 알려 의견을 듣고자 ｢행정절차법｣ 제46조의 규정에 의하여 다음과 같이 공고합니다.

2014년 8월 18일

식품의약품안전처장

｢축산물의 가공기준 및 성분규격｣ 일부개정고시(안) 행정예고

1. 개정 이유

축산물 중 대장균 O157:H7 이외의 장출혈성 대장균으로 인한 식중독 발생이 지속됨에 따라 식중독균 중 대장균 O157:H7의 규격을 장출혈성 대장균으로 확대·적용하여 축산물의 미생물 안전관리를 강화하고자 함

농축유류 중 가공연유의 수분 및 유지방 규격을 삭제하여 다양한 제품을 개발·생산할 수 있도록 하고, 버터류 중 버터와 가공버터의 정의 및 규격을 개정하여 유형 적용의 혼선을 없애고 가공 공정을 확대하여 산업체 애로사항을 해소하고자 함

조제유류 중 조제분유·조제우유, 성장기용조제분유·성장기용조제우유의 일부 영양성분과 열량 규격을 신설·변경하여 영․유아의 성장 발육에 필요한 영양요구량을 충족시키고 국내 영․유아의 영양섭취기준 및 국제규격과의 조화를 이루고자 함

2. 주요 내용

가. 축산물의 식중독균 규격 및 시험법 개정 [안 제1, 6, 가, (3) 및 제1, 6, 라, (2) 및 제2, 2, 바, (4), (바) 및 제2, 2, 카, (4), (마) 및 제3, Ⅲ, 9, 타, (1), (자) 및 제3, Ⅲ, 9, 타, (2) 및 제3, Ⅲ, 9, 타, (3), (가), (나) 및 제3, Ⅷ, 2, 로, 모, 더′, 러′]

1) 대장균 O157:H7 이외의 장출혈성 대장균에 의한 식중독 발생 증가로 이를 예방하기 위해 장출혈성 대장균 규격으로 확대·적용하여 국내·외 축산물에 대한 미생물 안전 관리 강화

2) 장출혈성 대장균 검출을 위한 관련 시험법 개정

나. 가공연유의 정의 및 규격 개정 [안 제2, 1, 자, (2), (마) 및 제2, 1, 자, (4)]

1) 가공연유의 정의 중 유고형분 함량은 규격에 명시되어 있으므로 중복 규정의 삭제

2) 가공연유의 수분 규격으로 다양한 제품 생산 시 애로사항이 발생됨에 따라 수분 규격을 삭제하고, 저지방우유류나 무지방우유류를 원료로 한 제품을 생산할 수 있도록 유지방 규격 삭제

다. 버터류의 기준 및 규격 개정 [안 제2, 1, 카, (1), (2) 및 (4)]

1) 버터와 가공버터를 생산하기 위한 유가공품 원료 및 가공 공정을 확대하고, 발효공정을 거친 제품의 특성을 고려하여 산가 규격을 제외할 수 있는 단서조항 신설

라. 조제분유․조제우유의 영양성분 규격 신설·변경 [안 제2, 1, 러, (4) 및 제3, Ⅲ, 1, 마 및 제3, Ⅴ, 1, 러, (3), (4), (5)]

1) 영․유아의 성장 발육에 필요한 영양요구량을 충족시키고 국제규격과의 조화를 도모할 수 있도록 열량,  α-리놀렌산, 리놀레산과 α-리놀렌산의 비율, 탄수화물의 규격 신설 및 조단백질, 조지방의 규격 변경

2) 안전하게 섭취할 수 있는 영양성분 규격 제시를 위하여 비타민 B12․C, 구리의 최대권장기준 신설

마. 성장기용 조제분유․성장기용 조제우유의 열량 규격 신설[안 제2, 1, 러, (4) 및 제3, Ⅴ, 1, 러, (3)]

1) 영․유아의 성장 발육에 필요한 영양요구량을 충족시키고 국제규격과의 조화를 도모할 수 있도록 열량 규격 신설

3. 의견 제출

｢축산물의 가공기준 및 성분규격｣ 일부개정 고시(안)에 대하여 의견이 있는 단체 또는 개인은 2014년 10월 17일까지 다음 사항을 기재한 의견서를 식품의약품안전처(우편번호 : 363-700, 주소 : 충청북도 청주시 흥덕구 오송읍 오송생명2로 187(연제리 643번지) 오송보건의료행정타운 식품의약품안전처, 참조 : 축산물기준과, 전화 043-719-3856∼60, 팩스 043-719-3850)에게 제출하여 주시기 바랍니다.

가. 예고사항에 대한 항목별 의견(찬․반 여부와 그 이유)

나. 성명(단체의 경우 단체명과 그 대표자의 성명), 주소 및 전화번호

다. 기타 참고사항

식품의약품안전처 고시 제2014- 호

｢축산물 위생관리법｣ 제4조제2항의 규정에 따른 ｢축산물의 가공기준 및 성분규격｣(식품의약품안전처 고시 제2014-128호, 2014.6.30.)을 다음과 같이 개정 고시합니다.

2014년   월   일

식품의약품안전처장

축산물의 가공기준 및 성분규격 일부개정고시(안)

축산물의 가공기준 및 성분규격 일부를 다음과 같이 개정한다.

제1, 6, 가, (3) 중 “대장균 O157:H7(Escherichia coli O157:H7)”을 “장출혈성  대장균”으로 한다.

제1, 6, 라, (2) 중 “대장균 O157:H7"을 “장출혈성 대장균”으로 한다.

제2, 1, 자, (2) 중 (마)를 다음과 같이 한다.

(마) 가공연유 : 원유·우유류·저지방우유류 또는 무지방우유류에 식품 또는 식품첨가물을 가하여 농축한 것을 말한다.

제2, 1, 자, (4) 중 가공연유의 (가), (나) 및 (라) 항목의 규격을 각각 다음과 같이 한다.

유형 항목	농축우유, 탈지농축우유	가당연유	가당탈지연유	가공연유
(가) 성상	유백색～황색의 균질한 액체로서 이미‧이취가 없어야 한다.	유백색～황색으로 균질하고 감미가 있는 액체로서 이미‧이취가 없어야 한다.	유백색～황색으로 균질하고 감미가 있는 액체로서 이미‧이취가 없어야 한다.	고유의 색택과 향미를 가진 것으로 이미‧이취가 없어야 한다.
(나) 수분(%)	-	27.0이하	29.0이하	<삭제>
(라) 유지방(%)	6.0이상(농축우유에 한한다)	8.0이상	-	<삭제>

(4) 성분규격

제2, 1, 카, (1) 및 (2) 중 (가), (나), (다)를 각각 다음과 같이 한다.

(1) 정의

버터류라 함은 원유, 우유류 등에서 유지방분을 분리한 것이나 발효시킨 것을 그대로 또는 이에  식품이나 식품첨가물을 가하고 교반하여 연압 등 가공한 것을 말한다.

(2) 축산물가공품의 유형

(가) 버터 : 원유, 우유류 등에서 유지방분을 분리한 것이나 발효시킨 것을교반하여 연압한 것으로 유지방분 80% 이상의 것을 말한다(식염이나 식용색소를 가한 것 포함).

(나) 가공버터 : 원유, 우유류 등에서 유지방분을 분리한 것이나 발효시킨 것 또는 버터에 식품이나 식품 첨가물을 가하고 교반, 연압 등 가공한 것으로 유지방분 30%이상(단, 유지방분의 함량이 제품의 지방함량에 대한 중량비율로서 50% 이상일 것)의 것을 말한다.

(다) 버터오일 : 버터 또는 유크림에서 유지방 이외의 거의 모든 수분과 무지유고형분을 제거한 것을 말한다.

제2, 1, 카, (4) 중 버터와 가공버터의 (라) 산가 항목의 규격을 각각 다음과 같이 한다.

(4) 성분규격

유형 항목	버터	가공버터	버터오일
(라) 산가	2.8이하 <신설> (단, 발효제품 제외)	2.8이하 <신설> (단, 발효제품 제외)	2.8이하

제2, 1, 러, (4)성분규격을 다음과 같이 한다.

(4) 성분규격

유 형 항 목	조제분유‧조제우유		성장기용조제분유‧ 성장기용 조제우유		기타조제분유‧ 기타조제우유
		최대권장 기준
(가) 성상	고유의 색택과 향미를 가지고 이미·이취가 없어야 한다.		고유의 색택과 향미를 가지고 이미·이취가 없어야 한다.		고유의 색택과 향미를 가지고 이미·이취가 없어야 한다.
(나) <신 설> 열량 (kcal/100㎖)	60∼70		60∼85		-
(다) 수분(%)	5.0이하 (단, 액상제품 제외)		5.0이하 (단, 액상제품 제외)		5.0이하 (단, 액상제품 제외)
(라) 조단백질 (g/100kcal)	1.8∼3.0		2.4∼5.5		-
(마) 조지방 (g/100kcal)	4.4∼6.0		3.0∼6.0
(바) 리놀레산 (mg/100kcal)	300이상	1400	300이상		-
(사) <신 설> α-리놀렌산 (mg/100kcal)	50이상		-
(아) <신 설> 리놀레산과 α-리놀 렌산의 비율	5:1～15:1		-		-
(자) <신 설> 탄수화물 (g/100kcal)	9.0∼14.0		-		-
(차) 유성분 (g/100kcal)	12.0이상		12.0이상		-
(카) 비타민A (㎍/100kcal 또는 IU/100kcal )	60～180 또는 200～600		75～225 또는 250～750		-
(타) 비타민D (㎍/100kcal 또는 IU/100kcal )	1.0～2.5 또는 40～100		1.0～3.0 또는 40～120		-
(파) 비타민C (㎎/100kcal)	10.0이상	<신 설> 30 (단, 조제우유는 70)	8.0이상		-
(하) 비타민B1 (㎍/100kcal)	60이상	300	40이상		-
(거) 비타민B2 (㎍/100kcal)	80이상	500	60이상		-
(너) 나이아신 (㎍/100kcal)	300이상	1500	250이상		-
(더) 비타민B6 (㎍/100kcal)	35이상	175	45이상 (다만, 단백질 3.0g 이상인 경우 초과 단백질 1g 당 비타민 B6 15㎍의 비율 이어야 한다)		-
	(다만, 단백질 2.3g 이상인 경우 초과 단백질 1g 당 비타민 B6 15㎍의 비율이어야 한다)
(러) 엽산 (㎍/100kcal)	10.0이상	50	4.0이상		-
(머) 판토텐산 (㎍/100kcal)	400이상	2000	300이상		-
(버) 비타민B12 (㎍/100kcal)	0.1이상	<신 설> 1.5	0.15이상		-
(서) 비타민K1 (㎍/100kcal)	4.0이상	27	4.0이상		-
(어) 비타민E (mg α-TE/100kcal 또는 IU/100kcal)	0.5이상 또는 0.7이상	5.0 또는 7.0	0.5이상 또는 0.7이상 (다만, 리놀레산 1g 이상인 경우 리놀레산 1g 당 최소한 0.5mg α-TE 또는 0.7IU의 비율이어야 한다)		-
	(다만, 리놀레산 1g 이상인 경우 리놀레산 1g 당 최소한 0.5mg α-TE 또는 0.7IU의 비율이어야 한다)
(저) 나트륨 (mg/100kcal)	20～60			20～85	-
(처) 칼륨 (㎎/100kcal)	60～180		80이상		-
(커) 염소 (㎎/100kcal)	50～160		55이상		-
(터) 칼슘 (㎎/100kcal)	50이상	140	90이상		-
(퍼) 인 (㎎/100kcal)	25이상	100	60이상 (다만, 칼슘과 인의 비율이 1:1～2:1이어야 한다)		-
	(다만, 칼슘과 인의 비율이 1:1～2:1이어야 한다)
(허) 마그네슘 (㎎/100kcal)	5.0이상	15	6.0이상		-
(고) 철 (㎎/100kcal)	0.45 이상 (철분강화제품의 경우 1.0이상)		1.0～2.0		-
(노) 요오드 (㎍/100kcal)	10.0 이상	60	5.0이상		-
(도) 구리 (㎍/100kcal)	35 이상	<신 설> 120	-		-
(로) 아연 (㎎/100kcal)	0.5이상	1.5	0.5이상		-
(모) 망간 (㎍/100kcal)	1.0이상	100	5.0이상		-
(보) 셀레늄 (㎍/100kcal)	1.0～9.0		9.0이하		9.0이하
(소) 인공감미료	검출되어서는 아니된다		검출되어서는 아니된다		검출되어서는 아니된다
(오) 타르색소	검출되어서는 아니된다		검출되어서는 아니된다		검출되어서는 아니된다
(조) 세균수	n=5, c=2, m=1,000/g, M=10,000/g(조제우유는 음성이어야한다) (단, 유산균 첨가 제품의 경우 유산균수를 제외한다)		n=5, c=2, m=1,000/g, M=10,000/g(성장기용조제우유는 음성이어야한다) (단, 유산균 첨가 제품의 경우 유산균수를 제외한다)		n=5, c=2, m=1,000/g, M=10,000/g(기타조제우유는 음성이어야한다) (단, 유산균 첨가 제품의 경우 유산균수를 제외한다)
(초) 대장균군	n=5, c=1, m<3, M=10		n=5, c=1, m<3, M=10		n=5, c=1, m<3, M=10
(코) 엔테로박터 사카자키	n=5, c=0, m=0/60g (조제분유에 한한다)		-		n=5, c=0, m=0/60g (기타조제분유에 한한다)
(토) 탄화물 (scorched particle)	100g당 7.5mg이하		100g당 7.5mg이하		100g당 7.5mg이하
(포) 바실러스 세레우스	1g당 100이하 (멸균제품의 경우 음성이어야한다)		1g당 100이하 (멸균제품의 경우 음성이어야한다)		1g당 100이하 (멸균제품의 경우 음성이어야한다)

※ 비타민A 1㎍=3.33IU, 비타민D 1㎍=40IU, 비타민E 1mg=1.49IU, 1mg α-TE(alpha-tocopherol equivalent)=1mg d-α-tocopherol

※ 기타조제분유, 기타조제우유의 경우 영양소는 표시량 이상어야 한다. 다만, 제한할 필요가 있는 영양소는 표시량 이하 또는 표시량 범위이내 이어야 한다.

주) 조제우유 및 성장기용조제우유의 성분규격 적용은 조제분유 및 성장기용 조제분유의 수분 규격(5.0%)을 기준으로 하여 각각의 성분규격을 환산적용한다.

제2, 2, 바, (4), (바) 중 “대장균 O157:H7"을 “장출혈성 대장균”으로 한다.

제2, 2, 카, (4), (마) 중 “대장균 O157:H7"을 “장출혈성 대장균”으로 한다.

제3, Ⅲ, 1. 마. 탄수화물 제목 다음에 본문을 다음과 같이 신설한다.

일반적으로 탄수화물은 검체 100 g 중에서 수분, 조단백질, 조지방 및 회분의 양을 감하여 얻은 양으로서 표시하고 축산물 중의 일반성분의 시험결과는 보통 백분율로 표시한다.

제3, Ⅲ, 9, 타, (1), (자)를 다음과 같이 신설한다.

(자) 중합효소연쇄반응장치

제3, Ⅲ, 9, 타, (2) 중 (가) 및 (라)부터 (아)까지를 각각 삭제하고, (나) 및 (다)를 각각 (가) 및 (나)로, (자)를 (다)로 하며, (라) 및 (마)를 각각 다음과 같이 신설한다.

(라) CT-Sorbitol MacConkey Agar(CT-SMAC 또는 TC-SMAC배지)

VIII.미생물시험용 시액 및 배지 2.배지 더′.에 따라 제조한다.

(마) BCIG 한천배지(5-bromo-4-chloro-3indolyl-β-D-glucuronide(BCIG) agar)

VIII.미생물시험용 시액 및 배지 2.배지 러′.에 따라 제조한다.

제3, Ⅲ, 9, 타, (3), (가)의 제목 “대장균 O157:H7"을 “장출혈성 대장균”으로 하고, 본문을 다음과 같이 한다.

본 시험법은 대장균 O157:H7과 대장균 O157:H7이 아닌 베로독소 생성 대장균(VTEC, Verotoxin-producing E. coli)을 모두 검출하는 시험법이다. 장출혈성 대장균의 낮은 최소감염량을 고려하여 검출 민감도 증가와 신속 검사를 위한 스크리닝 목적으로 증균 배양 후 배양액(1〜2㎖)에서 베로독소 유전자 확인시험을 우선 실시한다. 베로독소(VT1 그리고/또는 VT2) 유전자가 확인되지 않을 경우 불검출로 판정할 수 있다. 다만, 베로독소 유전자가 확인된 경우에는 반드시 순수 분리하여 분리된 균의 베로독소 유전자 보유 유무를 재확인한다. 베로독소가 확인된 집락에 대하여 생화학적 검사를 통하여 대장균으로 동정된 경우 장출혈성 대장균으로 판정한다.

제3, Ⅲ, 9, 타, (3), (가), 1)부터 3)까지를 각각 다음과 같이 하고,  4) 및 5)를 각각 다음과 같이 신설 한다.

1) 증균배양

검체 25 g(25㎖)을 취하여 225㎖ mTSB를 가한 후 35～37℃에서 24시간 증균배양한다.

2) 분리배양

장출혈성 대장균의 분리를 위해 CT-SMAC(TC-SMAC) 배지와 BCIG 한천배지에 각각 접종하여 35～37℃에서 18～24시간 배양한다.

3) 확인시험

CT-SMAC(TC-SMAC)배지에서는 sorbitol을 분해하지 않은 무색집락을, BCIG 한천배지에서는 청록색 집락 각 5개 이상을 취하여 보통한천배지에 옮겨 35～37℃에서 18～24시간 배양한다. 전형적인 집락이 5개 이하일 경우 취할 수 있는 모든 집락에 대하여 확인시험을 실시한다. 배양 후 집락에 대하여 다음의 베로독소 유전자 PCR 확인 시험을 수행한 후 베로독소 양성 집락을 대상으로 그람음성간균을 확인하고 생화학시험을 실시하여 대장균으로 확인된 경우 장출혈성 대장균으로 판정한다.

4) 베로독소 유전자 확인실험

베로독소 유전자는 다음의 PCR법에 따라 실시한다.

(1) 주형유전자 준비

전형적인 한 개의 집락을 취하여 멸균증류수 100㎕에 현탁한 후, 10분간 끓여 원심분리하고, 상등액 10㎕를 취하여 시료로 사용한다.

(2) PCR 프라이머 염기서열

유전자	염기서열(5‘→3’)	결과확인
VT1	(F) ATA AAT CGC CAT TCG TTG ACT AC (R) AGA ACG CCC ACT GAG ATC ATC	180bp
VT2	(F) GGC ACT GTC TGA AAC TGC TCC (R) TCG CCA GTT ATC TGA CAT TCT G	255bp

(3) PCR 반응액 조제

성분	최종농도	Stock용액 농도	1회 용량
완충액	1×	10×	5 μL
MgCl2	1.2mM	12mM	5 μL
dNTPs	0.2mM	2.5mM	4 μL
VT1 프라이머(F)	50 pmol/tube	50 pmol/μL	1 μL
VT1 프라이머(R)	50 pmol/tube	50 pmol/μL	1 μL
VT2 프라이머(F)	50 pmol/tube	50 pmol/μL	1 μL
VT2 프라이머(R)	50 pmol/tube	50 pmol/㎕	1 μL
주형 DNA	25～50ng 또는 10μL	-	10 μL
Taq polymerase	2.5U/tube	5U/μL	0.5 μL
증류수	-	-	21.5 μL
총량	-	-	50 μL

(4) PCR 반응조건

PCR 반응은 아래 표의 반응 단계 1∼5까지 순차적으로 실시하되 5단계는 생략할 수 있다. 반응 1단계는 10회 반복으로 결합온도 65℃, 반응 2단계는 5회 반복으로 결합온도 64℃에서 시작하여 반응회수 마다 결합온도를 1℃ 감소시켜 마지막 5회는 결합온도가 60℃이며, 뒤의 반응 3단계는 10회 반복으로 결합온도 60℃로 유지하고, 반응 4단계는 신장 시간을 150초로 늘려 10회 반응시킨다.

반응 단계	구분	온도	시간	반응회수
1	변성(denaturation)	95℃	60초	10회
	결합(annealing)	65℃	120초
	신장(extension)	72℃	90초
2	변성(denaturation)	95℃	60초	5회
	결합(annealing)	64℃→60℃ 1℃/회 감소	120초
	신장(extension)	72℃	90초
3	변성(denaturation)	95℃	60초	10회
	결합(annealing)	60℃	120초
	신장(extension)	72℃	90초
4	변성(denaturation)	95℃	60초	10회
	결합(annealing)	60℃	120초
	신장(extension)	72℃	150초
5	보존(store)	4℃	-	-

※ 위 방법은 ISO의 Shiga toxin-producing Escherichia coli(STEC) PCR검사법의 일부를 변경하여 사용한 것임

(5) 결과 확인

최종산물의 반응액 5㎕를 취하여 2.0% agarose gel로 100V에서 25분간 전기영동하고 EtBr(1ug/㎖) 또는 동등한 기능의 염색시약으로 염색한 후 UV를 이용하여 반응생성물을 확인한다. 이때, DNA 크기를 알 수 있도록 100bp Ladder를 동시에 전기영동 한다. VT1 유전자는 180bp, VT2 유전자는 255bp에서 반응생성물을 확인할 수 있다. VT1 또는 VT2 유전자가 확인된 것은 장출혈성 대장균이 검출된 것으로 판정한다.

5) 장출혈성 대장균 중 대장균 O157:H7의 확정이 필요할 경우 분리배양 시 CT-SMAC(TC-SMAC) 배지를 사용하여 sorbitol을 분해하지 않는 무색집락에 대하여 최종적으로 베로독소 보유 및 대장균 동정 확인한다. 양성균주에 대하여 O157과 H7 혈청형의 결정은 제조사가 제시하는 방법에 따라 시험한다. 최종적으로 베로독소 유전자(VT1 또는/그리고 VT2) 양성, O157 및 H7 혈청 확인, 대장균으로 확인되었을 때 O157:H7으로 판정한다.

제3, Ⅲ, 9, 타, (3), (나) 중 “장관병원성"은 “장병원성"으로, “장관독소원성"은 “장독소원성"으로, “장관침입성"은 “장침입성"으로, “장관출혈성"은 “장출혈성"으로, “대장균 O157:H7"을 “장출혈성 대장균"으로 한다.

제3, Ⅴ, 1. 러. 조제유류 중 “(3)부터 (5)”까지를 각각 “(6)부터 (8)”까지로 하고, (3), (4) 및 (5)를 각각 다음과 같이 신설한다.

(3) 열량

Ⅲ. 일반시험법 1.일반성분시험법 바. 열량의 계산에 따라 시험한다.

(4) α-리놀렌산

Ⅲ. 일반시험법 1.일반성분시험법 라. 지질 (4) 지방산에 따라 시험한다.

(5) 탄수화물

Ⅲ. 일반시험법 1.일반성분시험법 마. 탄수화물에 따라 시험한다. 회분은 Ⅴ. 가공품 시험법 1. 유가공품 파. 가공치즈 (2)유고형분 및 유지방 (다)유회분에 따라 시험한다.

제3, Ⅷ, 2, 로 중 “Novobiocin(20 ㎍/mL)"을 “Novobiocin(8 ㎍/mL)"로 한다.

제3, Ⅷ, 2, 모 중 “Novobiocin(20 ㎍/mL)"을 “Novobiocin(8 ㎍/mL)"로 한다.

제3, Ⅷ, 2, 더′ 및 러′를 각각 다음과 같이 신설 한다.

더′. CT-SMAC(TC-SMAC) 한천배지(Cefixime Tellurite-Sorbitol MacConkey Agar)

Potassium tellurite	2.5 mg

(1% Potassium tellurite 용액 250 ㎕)

Cefixime	0.05 mg

(95% 에탄올 용액 1 L에 cefixime 50 mg을 녹인 용액 1㎖)

MacConkey Sorbitol 한천배지 1,000㎖을 121℃에서 15분간 멸균하고, 50℃정도로 식힌 다음 여과멸균한 위의 성분들을 차례로 가한다. 1% Potassium tellurite 용액은 4℃에서 1개월간, Cefixime 용액은 -20℃에서 1년간 보관이 가능하다.

러′. BCIG 한천배지(5-bromo-4-chloro-3indolyl-β-D-glucuronide(BCIG) agar)

Tryptone	20.0 g

Bile salts No. 3                                                1.5 g

Agar                                                         15.0 g

BCIG (as cyclohexylammonium salt)                           0.075 g

위의 성분을 증류수 1,000㎖에 녹여 pH 7.2 ± 0.2로 조정한 후 121℃에서 15분간 멸균한다.

부칙 <제2014-   호, 2014.  .  .>

제1조(시행일) 이 고시는 고시한 날부터 시행한다. 다만 제1. 6. 가. (3), 제1. 6. 라. (2), 제2. 2. 바. (4). (바), 제2. 2. 카. (4). (마), 제3. Ⅲ. 9. 타. (1). (자), 제3. Ⅲ. 9. 타. (2), 제3. Ⅲ. 9. 타. (3). (가). (나), 제3. Ⅷ. 2. 로. 모. 더′. 러′의 개정 규정은 고시 후 30일이 경과한 날부터 시행하고, 제2. 1. 러. (4), 제3. Ⅲ. 1. 마, 제3. Ⅴ. 1. 러. (3). (4). (5)의 개정 규정은 고시 후 1년이 경과한 날부터 시행한다.

제2조(적용례) 이 고시는 고시 시행 후 최초로 제조·가공 또는 수입(선적일 기준)하는 축산물부터 적용한다.

제3조(검사가 진행 중인 축산물등에 관한 경과조치) 이 고시 시행 당시 접수되어 검사가 진행 중인 사항에 대하여는 종전의 규정을 적용한다.

제4조(이미 제조된 축산물등에 관한 경과조치) 이 고시 시행 당시 종전의 규정에 따라 제조·가공 또는 수입한 축산물(수입하기 위해 선적한 축산물을 포함한다)은 해당 축산물의 유통기한까지 판매하거나 판매의 목적으로 진열 또는 운반하거나 영업 상 사용할 수 있다.

신․ 구조문 대비표

현  행

개 정 안

제1. 축산물에 대한 공통기준 및 규격

1. ∼ 5. (생  략)

6. 축산물의 성분규격

가. 일반규격

(1) ∼ (2) (생  략)

(3) 식중독균

식육(제조, 가공용 원료를 제외한다), 살균 또는 멸균처리 하였거나 더 이상의 가공, 가열조리를 하지 않고 그대로 섭취하는 가공품에서는 특성에 따라 살모넬라(Salmonella spp.), 황색포도상구균(Staphylococcus aureus), 장염 비브리오(Vibrio parahaemolyticus), 클로스트리디움 퍼프린젠스(Clostridium perfringens), 리스테리아 모노사이토제네스(Listeria monocytogenes), 대장균  O157:H7(Escherichia coli O157:H7)등 식중독균이 n=5, c=0, m=0/25g이다. 다만, 다음의 축산물에 대한 장염비브리오, 황색포도상구균, 클로스트리디움 퍼프린젠스는 다음과 같이 적용된다.

(가) ∼ (다) (생  략)

나.～다. (생  략)

라. 식육의 검사기준

(1)  (생  략)

(2) 대장균 O157:H7 : n=5, c=0, m=0/25g(분쇄육에 한한다)

마.～사. (생  략)

7. ∼ 8. (생  략)

제2. 축산물별 기준 및 규격

1. 유가공품

가. ∼ 아. (생  략)

자. 농축유류

(1) (생  략)

(2) 축산물가공품의 유형

(가) ∼ (라) (생  략)

(마) 가공연유 : 원유･우유류·저지방우유류 또는 무지방우유류에 식품 또는 식품첨가물을 가하여 농축한 것으로 유고형분 22.0%이상의 것을 말한다.

(3) (생  략)

(4) 성분규격

유형 항목	농축우유, 탈지농축우유	가당연유	가당 탈지연유	가공연유
(가) 성상	(생 략)	(생 략)	(생 략)	고유의 색택을 가지고 균질하고 감미가 있는 액체로서 이미‧이취가 없어야 한다.
(나) 수분(%)	(생 략)	(생 략)	(생 략)	32.0 이하
(다) 유고형분(%)	(생 략)	(생 략)	(생 략)	(생 략)
(라) 유지방(%)	(생 략)	(생 략)	(생 략)	6.0 이상
(마) 산도(%)	(생 략)	(생 략)	(생 략)	(생 략)
(바) 당분 (유당포함%)	(생 략)	(생 략)	(생 략)	(생 략)
(사) 세균수	(생 략)	(생 략)	(생 략)	(생 략)
(아) 대장균군	(생 략)	(생 략)	(생 략)	(생 략)

차. (생  략)

카. 버터류

(1) 정의

버터류라 함은 원유 또는 우유류에서 유지방분을 분리한 것이나 발효시킨 것을 그대로 또는 이에 다른 식품이나 식품첨가물을 가하고 교반, 연압한 것을 말한다.

(2) 축산물가공품의 유형

(가) 버터 : 원유의 유지방분을 분리하여 교반, 연압한 것으로 유지방분 80% 이상의 것을 말한다.

(나) 가공버터 : 원유 또는 우유의 유지방분을 분리하여 이에 식품이나 식품 첨가물을 가한 후, 교반, 연압한 것으로 유지방분 30%이상(단, 유지방분의 함량이 제품의 지방함량에 대한 중량비율로서 50% 이상일 것)의 것을 말한다.

(다) 버터오일 : 버터 또는 크림에서 유지방 이외의 거의 모든 수분과 무지유고형분을 제거한 것을 말한다.

(3) (생  략)

(4) 성분규격

유형 항목	버터	가공버터	버터오일
(가) 성상	(생 략)	(생 략)	(생 략)
(나) 수분(%)	(생 략)	(생 략)	(생 략)
(다) 유지방(%)	(생 략)	(생 략)	(생 략)
(라) 산가	2.8이하	2.8이하	(생 략)
(마) 지방의 낙산가	(생 략)	(생 략)	(생 략)
(바) 타르색소	(생 략)	(생 략)	(생 략)
(사) 대장균군	(생 략)	(생 략)	(생 략)
(아) 산화방지제(g/㎏)	(생 략)
(자) 보존료(g/㎏)	(생 략)

타. ∼ 더. (생  략)

러. 조제유류

(1) ∼ (3) (생  략)

유 형 항 목		조제분유‧조제우유		성장기용조제분유‧ 성장기용조제우유	기타조제분유‧ 기타조제우유
			최대권장기준
(가) (생략)
<신 설>	<신 설>			<신 설>	-
(나) (생략)
(다) 조단백질 (g/100kcal)		1.8～4.0		(생략)	-
(라) 조지방 (g/100kcal) 리놀레산 (mg/100kcal)		3.0～6.0		(생략)	-
		(생략)	(생략)
<신 설>		<신 설>		-	-
<신 설>		<신 설>		-	-
<신 설>		<신 설>		-	-
(마) ～ (사) (생략)
(아) 비타민C (㎎/100kcal)		(생략) <최대권장기준 신설>		(생략)	-
(자) ～ (하) (생략)
(거) 비타민B12 (㎍/100kcal)		(생략) <최대권장기준 신설>		(생략)	-
(너) ～ (커) (생략)
(터) 구리 (㎍/100kcal)		(생략) <최대권장기준 신설>		(생략)	-
(퍼) ～ (오) (생략)

(4) 성분규격

머. ∼ 서. (생  략)

2. 식육가공품 및 포장육

가. ∼ 마. (생  략)

바. 분쇄가공육제품

(1) ∼ (3) (생  략)

(4) 성분규격

(가) ∼ (마) (생  략)

(바) 대장균 O157:H7: n=5, c=0, m=0/25g

(사) (생  략)

사. ∼ 차. (생  략)

카. 포장육

(1) ∼ (3) (생  략)

(4) 성분규격

(가) ∼ (라) (생  략)

(마) 대장균 O157:H7: n=5, c=0, m=0/25g(다만, 분쇄에 한한다)

(5) (생  략)

3. (생  략)

제3. 축산물 시험방법

Ⅰ. ∼ Ⅱ. (생  략)

Ⅲ. 일반시험법

1. 일반성분시험법

가. ∼ 라. (생  략)

마. 탄수화물

<신  설>

바. (생  략)

2. ∼ 8. (생  략)

9. 미생물시험법

가. ∼ 카. (생 략)

타. 병원성대장균(Pathogenic E. coli)

(1) 기구 및 재료

(가) ∼ (아) (생  략)

< 신  설 >

(2) 배지 및 시액

(가) (생  략)

(나) ～ (다) (생  략)

(라) ∼ (아) (생  략)

(자) (생  략)

< 신  설 >

< 신  설 >

(3) 시험방법

(가) 대장균 O157:H7

대장균 O157:H7검출은 분리동정법을 원칙으로 하고 신속하게 검출하기 위하여 공인된 검사킷트를 이용한 EIA, PCR법등을 병행할 수도 있다.

1) 증균배양

채취한 시료액 25㎖(g)를 mEC broth(novobiocin 20㎍/㎖) 또는 mTSB배지(novobiocin(20㎍/㎖)) 225㎖에 37℃또는 42℃에서 18 ～ 24시간 증균배양 한다. 균 검출효율을 증진시키기 위하여 동일한 배지를 사용하여 2회 연속 증균배양을 실시할 수 있다.

2) 분리배양

증균배약액을 Cefixime (0.05㎍/㎖) 및 Potassium tellurite(2.5㎍/㎖)가 첨가된 SMAC 또는 CHROMagar O157에 도말하여 37℃에서 24시간 배양한다. 배양후 솔비톨을 분해하지 않는 집락 즉, SMAC에서는 무색, CHROMagar O157배지에서 자주색인 집락에 대해 각 평판당 5개 이상씩 MacConkey Agar 또는 EMB Agar에 획선하여 24시간 배양한다.

3) 확인시험

MacConkey Agar에서 lactose 분해균 및 EMB Agar에서 녹색성의 금속광택 집락에 대해 O157항혈청을 이용한 응집반응을 실시한다. 응집이 일어나는 균에 대해서는 TSI, IMViC시험으로 대장균임을 확인한다. TSI에서 A/A(노란색/노란색)의 형성균을 대상으로 Indol(+), MR(+), VP(-), Citrate(-), Urease(-). Arabinose(+), Lysine(+), MUG(-), KCN(-), Cellobiose 분해능(-) 등의 시험으로 대장균임을 확인한다. 생화학성상시험은 API킷트 또는 Vitek등의 미생물동정기를 이용할수 있다. 대장균으로 확인동정된 것은 O157등의  O항혈청과 H7의 H 항혈청을 이용하여 혈청학적검사를 실시하여 혈청형을 확인한다. 대장균의 베로톡신산생능 검사는 베로세포를 이용한 cytotoxicity assay방법이나 PCR법으로 실시할 수 있다.

< 신  설 >

< 신  설 >

(나) 기타 병원성 대장균

이 실험은 필요하다고 인정될 때 병원성 대장균을 검사할 수 있으며, 대장균은 장관병원성 대장균(Enteropathogenic E. coli ; EPEC), 장관독소원성 대장균(Enterotoxigenic E. coli ; ETEC), 장관침입성 대장균(Enteroinvasive E. coli ; EIEC), 장관출혈성 대장균(Enterohemorrhagic E.coli ; EHEC)등 여러 가지로 분류하고 있다.

병원성대장균의 분리는 대장균 O157:H7 시험법과 동일하게 실시한다. 다만 분리배양에서 MacConkey Agar를 사용하고 유당을 분해하는 집락, 즉 붉은색 집락에 대해서 생화학적 성상검사를 실시하여 대장균임을 확인하고 O26, O111등의 O항혈청과 H1, H11등의 H항혈청을 이용하여 혈청형을 확인한다. 필요하다고 인정될 때에는 베로톡신 산생 등의 병원성 시험을 실시한다.

Ⅳ. (생  략)

Ⅴ. 가공품 시험법

1. 유가공품

가. ∼ 더. (생  략)

러. 조제유류

(1) ∼ (2) (생  략)

<신  설>

<신  설>

<신  설>

(3) ∼ (5) (생  략)

머. ∼ 서. (생  략)

2. ∼ 3. (생  략)

Ⅵ. ∼ Ⅶ. (생  략)

Ⅷ. 미생물시험용 시액 및 배지

1. (생  략)

2. 배지

가. ∼ 도. (생  략)

로. mEC Broth(mEC 배지)

(전단 생략)

위의 성분에 증류수를 가하여 1,000 mL로 만들고 멸균한 후 pH가 6.9 ∼ 7.1이 되도록 맞추고 발효관에 분주하여 15파운드(121℃)로 15분간 고압증기멸균한다. 배지를 약 50℃로 식힌 후 여과멸균한 Novobiocin(20 ㎍/mL)을 첨가한다.

모. mTSB

(전단 생략)

위의 성분에 증류수를 가하여 1,000 mL로 만들고 끓여 녹인 후 15파운드에서 15분간 멸균하고 pH 7.3으로 조정한다. 배지를 약 50℃로 식힌 후 여과멸균한 Novobiocin(20 ㎍/mL)을 첨가한다.

보 ∼ 너′(생  략)

< 신  설 >

< 신  설 >

Ⅸ. (생  략)

제1. 축산물에 대한 공통기준 및 규격

1. ∼ 5. (현행과 같음)

6. 축산물의 성분규격

가. 일반규격

(1) ∼ (2) (현행과 같음)

(3) 식중독균

------------------------ --------------------------------------------------------------------------- -------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------장출혈성 대장균 등----------

-------------------------  ---------------------------------------------------------------------------------------------------.

(가) ∼ (다) (현행과 같음)

나.～다. (현행과 같음)

라. 식육의 검사기준

(1) (현행과 같음)

(2) 장출혈성 대장균 :---------

------------------------

마.～사. (현행과 같음)

7. ∼ 8. (현행과 같음)

제2. 축산물별 기준 및 규격

1. 유가공품

가. ∼ 아. (현행과 같음)

자. 농축유류

(1) (현행과 같음)

(2) 축산물가공품의 유형

(가) ∼ (라) (현행과 같음)

(마) 가공연유 : ------------

------------------------

-----------------------

---------- 것을 말한다.

(3) (현행과 같음)

유형 항목	농축우유, 탈지농축우유	가당연유	가당 탈지연유	가공연유
(가) 성상	(현행과 같음)	(현행과 같음)	(현행과 같음)	고유의 색택과 향미를 가진 것으로 이미‧ 이취가 없어야 한다.
(나) 수분(%)	(현행과 같음)	(현행과 같음)	(현행과 같음)	<삭 제>
(다) 유고형분(%)	(현행과 같음)	(현행과 같음)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
(라) 유지방(%)	(현행과 같음)	(현행과 같음)	(현행과 같음)	<삭 제>
(마) 산도(%)	(현행과 같음)	(현행과 같음)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
(바) 당분 (유당포함%)	(현행과 같음)	(현행과 같음)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
(사) 세균수	(현행과 같음)	(현행과 같음)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
(아) 대장균군	(현행과 같음)	(현행과 같음)	(현행과 같음)	(현행과 같음)

(4) 성분규격

차. (현행과 같음)

카. 버터류

(1) 정의

---------- 원유, 우유류 등에서------------------------------------ 식품이나 식품첨가물을 가하고 교반하여 연압 등 가공한 것-------- .

(2) 축산물가공품의 유형

(가) 버터 : 원유, 우유류 등에서 유지방분을 분리한 것이나 발효시킨 것을 교반하여 연압한 것으로 ------------------

-----------(식염이나 식용색소를 가한 것 포함).

(나) 가공버터 : 원유, 우유류 등에서 유지방분을 분리한 것이나 발효시킨 것 또는 버터에 식품이나 식품 첨가물을 가하고 교반, 연압 등 가공한 것으로-----------------------------------------------------------------------.

(다) 버터오일 : ------- 유크림---------------------------------------------------------.

(3) (현행과 같음)

(4) 성분규격

유형 항목	버터	가공버터	버터오일
(가) 성상	(현행과 같음)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
(나) 수분(%)	(현행과 같음)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
(다) 유지방(%)	(현행과 같음)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
(라) 산가	2.8이하 (단, 발효제품 제외)	2.8이하 (단, 발효제품 제외)	(현행과 같음)
(마) 지방의 낙산가	(현행과 같음)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
(바) 타르색소	(현행과 같음)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
(사) 대장균군	(현행과 같음)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
(아) 산화방지제(g/㎏)	(현행과 같음)
(자) 보존료(g/㎏)	(현행과 같음)

타. ∼ 더. (현행과 같음)

러. 조제유류

(1) ∼ (3) (현행과 같음)

유 형 항 목	조제분유‧조제우유		성장기용조제분유‧ 성장기용조제우유	기타조제분유‧ 기타조제우유
		최대권장기준
(가) (현행과 같음)
(나) <신 설> 열량 0kcal/100㎖)	60～70		60～85
(다) (현행 (나)와 같음)
(라) 조단백질 (g/100kcal)	1.8～3.0		(현행과 같음)	-
(마) 조지방 (g/100kcal)	4.4～6.0		(현행과 같음)
(바) 리놀레산 (mg/100kcal)	(현행과 같음)	(현행과 같음)	(현행과 같음)	-
(사) <신 설> α-리놀렌산 (mg/100kcal)	50이상		-	-
(아) <신 설> 리놀레산과 α-리놀렌산의 비율	5:1～15:1		-	-
(자) <신 설> 탄수화물 (g/100kcal)	9.0∼14.0		-	-
(차) ～ (타) (현행 (마) ～ (사)와 같음)
(파) 비타민C (㎎/100kcal)	(현행과 같음)	30 (단, 조제 우유는 70)	(현행과 같음)	-
(하) ～ (머) (현행 (자) ～ (하)와 같음)
(버) 비타민B12 (㎍/100kcal)	(현행과 같음)	1.5	(현행과 같음)	-
(서) ～ (노) (현행 (너) ～ (커)와 같음)
(도) 구리 (㎍/100kcal)	(현행과 같음)	120	-	-
(로) ～ (포) (현행 (퍼) ～ (오)와 같음)

(4) 성분규격

머. ∼ 서. (현행과 같음)

2. 식육가공품 및 포장육

가. ∼ 마. (현행과 같음)

바. 분쇄가공육제품

(1) ∼ (3) (현행과 같음)

(4) 성분규격

(가) ∼ (마) (현행과 같음)

(바) 장출혈성 대장균:------

------

(사) (현행과 같음)

사. ∼ 차. (현행과 같음)

카. 포장육

(1) ∼ (3) (현행과 같음)

(4) 성분규격

(가) ∼ (라) (현행과 같음)

(마) 장출혈성 대장균: -------

---------------------

-----

(5) (현행과 같음)

3. (현행과 같음)

제3. 축산물 시험방법

Ⅰ. ∼ Ⅱ. (현행과 같음)

Ⅲ. 일반시험법

1. 일반성분시험법

가. ∼ 라. (현행과 같음)

마. 탄수화물

일반적으로 탄수화물은 검체 100 g 중에서 수분, 조단백질, 조지방 및 회분의 양을 감하여 얻은 양으로서 표시하고 축산물 중의 일반성분의 시험결과는 보통 백분율로 표시한다.

바. (현행과 같음)

2. ∼ 8. (현행과 같음)

9. 미생물시험법

가. ∼ 카. (현행과 같음)

타. 병원성대장균(Pathogenic E. coli)

(1) 기구 및 재료

(가) ∼ (아) (현행과 같음)

(자) 중합효소연쇄반응장치

(2) 배지 및 시액

< 삭 제 >

(가) ～ (나) (현행 (나) 및 (다)와 같음)

< 삭 제 >

(다) (현행 (자)와 같음)

(라) CT-Sorbitol MacConkey Agar(CT-SMAC 또는 TC-SMAC 배지)

VIII.미생물시험용 시액 및 배지 2.배지 더′.에 따라 제조한다.

(마) BCIG 한천배지(5-bromo-4-chloro-3indolyl-β-D-glucuronide (BCIG) agar)

VIII.미생물시험용 시액 및 배지 2.배지 러′.에 따라 제조한다.

(3) 시험방법

(가) 장출혈성 대장균

본 시험법은 대장균 O157:H7과 대장균 O157:H7이 아닌  베로독소 생성 대장균(Verotoxin-producing E. coli)을 모두 검출하는 시험법이다. 장출혈성 대장균의 낮은 최소감염량을 고려하여 검출 민감도 증가와 신속 검사를 위한 스크리닝 목적으로 증균 배양 후 배양액(1〜2㎖)에서 베로독소 유전자 확인시험을 우선 실시한다. 베로독소(VT1 그리고/또는 VT2) 유전자가 확인되지 않을 경우 불검출로 판정할 수 있다. 다만, 베로독소 유전자가 확인된 경우에는 반드시 순수 분리하여 분리된 균의 베로독소 유전자 보유 유무를 재확인한다. 베로독소가 확인된 집락에 대하여 생화학적 검사를 통하여 대장균으로 동정된 경우 장출혈성 대장균으로 판정한다.

1) 증균배양

검체 25 g(25 ㎖)을 취하여 225㎖ mTSB를 가한 후 35～37℃에서 24시간 증균배양한다.

2) 분리배양

장출혈성 대장균의 분리를 위해 CT-SMAC(TC-SMAC) 배지와 BCIG 한천배지에 각각 접종하여 35～37℃에서 18～24시간 배양한다.

3) 확인시험

CT-SMAC(TC-SMAC)배지에서는 sorbitol을 분해하지 않은 무색집락을, BCIG 한천배지에서는 청록색 집락 각 5개 이상을 취하여 보통한천배지에 옮겨 35～37℃에서 18～24시간 배양한다. 전형적인 집락이 5개 이하일 경우 취할 수 있는 모든 집락에 대하여 확인시험을 실시한다. 배양 후 집락에 대하여 다음의 베로독소 유전자 PCR 확인 시험을 수행한 후 베로독소 양성 집락을 대상으로 그람음성간균을 확인하고 생화학시험을 실시하여 대장균으로 확인된 경우 장출혈성 대장균으로 판정한다.

4) 베로독소 유전자 확인실험

베로독소 유전자는 다음의 PCR법에 따라 실시한다.

(1) 주형유전자 준비

전형적인 한 개의 집락을 취하여 멸균증류수 100μL에 현탁한 후, 10분간 끓여 원심분리하고, 상등액 10μL를 취하여 시료로 사용한다.

(2) PCR 프라이머 염기서열

유전자	염기서열(5‘→3’)	결과확인
VT1	(F) ATA AAT CGC CAT TCG TTG ACT AC (R) AGA ACG CCC ACT GAG ATC ATC	180bp
VT2	(F) GGC ACT GTC TGA AAC TGC TCC (R) TCG CCA GTT ATC TGA CAT TCT G	255bp

(3) PCR 반응액 조제

성분	최종농도	Stock용액 농도	1회 용량
완충액	1×	10×	5 μL
MgCl2	1.2mM	12mM	5 μL
dNTPs	0.2mM	2.5mM	4 μL
VT1 프라이머(F)	50 pmol/tube	50 pmol/μL	1 μL
VT1 프라이머(R)	50 pmol/tube	50 pmol/μL	1 μL
VT2 프라이머(F)	50 pmol/tube	50 pmol/μL	1 μL
VT2 프라이머(R)	50 pmol/tube	50 pmol/㎕	1 μL
주형 DNA	25∼50ng 또는 10μL	-	10 μL
Taq polymerase	2.5U/tube	5U/μL	0.5 μL
증류수	-	-	21.5 μL
총량	-	-	50 μL

(4) PCR 반응조건

PCR 반응은 아래 표의 반응 단계 1∼5까지 순차적으로 실시하되 5단계는 생략할 수 있다. 반응 1단계는 10회 반복으로 결합온도 65℃, 반응 2단계는 5회 반복으로 결합온도 64℃에서 시작하여 반응회수 마다 결합온도를 1℃ 감소시켜 마지막 5회는 결합온도가 60℃이며, 뒤의 반응 3단계는 10회 반복으로 결합온도 60℃로 유지하고, 반응 4단계는 신장 시간을 150초로 늘려 10회 반응시킨다.

반응 단계	구분	온도	시간	반응회수
1	변성(denaturation)	95℃	60초	10회
	결합(annealing)	65℃	120초
	신장(extension)	72℃	90초
2	변성(denaturation)	95℃	60초	5회
	결합(annealing)	64℃→60℃ 1℃/회 감소	120초
	신장(extension)	72℃	90초
3	변성(denaturation)	95℃	60초	10회
	결합(annealing)	60℃	120초
	신장(extension)	72℃	90초
4	변성(denaturation)	95℃	60초	10회
	결합(annealing)	60℃	120초
	신장(extension)	72℃	150초
5	보존(store)	4℃	-	-

※ 위 방법은 ISO의 Shiga toxin-producing Escherichia coli(STEC) PCR 검사법의 일부를 변경하여 사용한 것임

(5) 결과 확인

최종산물의 반응액 5 μL를 취하여 2.0% agarose gel로 100V에서 25분간 전기영동하고 EtBr(1ug/㎖) 또는 동등한 기능의 염색시약으로 염색한후 UV를 이용하여 반응생성물을 확인한다. 이때, DNA 크기를 알 수 있도록 100bp Ladder를 동시에 전기영동 한다. VT1 유전자는 180bp, VT2 유전자는 255bp에서 반응생성물을 확인할 수 있다. VT1 또는 VT2 유전자가 확인된 것은 장출혈성 대장균이 검출된 것으로 판정한다.

5) 장출혈성 대장균 중 대장균 O157:H7의 확정이 필요할 경우 분리배양 시 CT-SMAC(TC-SMAC) 배지를 사용하여 sorbitol을 분해하지 않는 무색집락에 대하여 최종적으로 베로독소 보유 및 대장균 동정 확인한다. 양성균주에 대하여 O157과 H7 혈청형의 결정은 제조사가 제시하는 방법에 따라 시험한다. 최종적으로 베로독소 유전자(VT1 또는/그리고 VT2) 양성, O157 및 H7 혈청 확인, 대장균으로 확인되었을 때 O157:H7으로 판정한다.

(나) 기타 병원성 대장균

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-------------장병원성------

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장독소원성-----------------

-------------장침입성------

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장출혈성-------------------

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----------.

------------------ 장출혈성

대장균 -------------------

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---------.

Ⅳ. (현행과 같음)

Ⅴ. 가공품 시험법

1. 유가공품

가. ∼ 더. (현행과 같음)

러. 조제유류

(1) ∼ (2) (현행과 같음)

(3) 열량

Ⅲ. 일반시험법 1.일반성분시험법 바. 열량의 계산에 따라 시험한다.

(4) α-리놀렌산

Ⅲ. 일반시험법 1.일반성분시험법 라. 지질 (4) 지방산에 따라 시험한다.

(5) 탄수화물

Ⅲ. 일반시험법 1.일반성분시험법 마. 탄수화물에 따라 시험한다.  회분은 Ⅴ. 가공품 시험법 1. 유가공품 파. 가공치즈 (2)유고형분 및 유지방 (다)유회분에 따라 시험한다.

(6) ∼ (8) (현행(3)∼(5)와 같음)

머. ∼ 서. (현행과 같음)

2. ∼ 3. (현행과 같음)

Ⅵ. ∼ Ⅶ. (현행과 같음)

Ⅷ. 미생물시험용 시액 및 배지

1. (현행과 같음)

2. 배지

가. ∼ 도. (현행과 같음)

로. mEC Broth(mEC 배지)

(현행과 같음)

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------------Novobiocin(8 ㎍/mL)-------.

모. mTSB

(현행과 같음)

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Novobiocin(8 ㎍/mL) --------.

보 ∼ 너′(현행과 같음)

더.′. CT-SMAC(TC-SMAC) 한천배지(Cefixime Tellurite-Sorbitol MacConkey Agar)

Potassium tellurite	2.5 mg

(1% Potassium tellurite 용액 250 μL)

Cefixime	0.05 mg

(95% 에탄올 용액 1 L에 cefixime 50 mg을 녹인 용액 1㎖)

MacConkey Sorbitol 한천배지 1,000㎖을 121℃에서 15분간 멸균하고, 50℃정도로 식힌 다음 여과멸균한 위의 성분들을 차례로 가한다. 1% Potassium tellurite 용액은 4℃에서 1개월간, Cefixime 용액은 -20℃에서 1년간 보관이 가능하다.

러′. BCIG 한천배지    (5-bromo-4-chloro-3indolyl-β-D-glucuronide (BCIG) agar)

Tryptone	20.0 g

Bile salts No. 3            1.5 g

Agar                     15.0 g

BCIG (as cyclohexylammonium salt) 0.075 g

위의 성분을 증류수 1,000㎖에 녹여 pH 7.2 ± 0.2로 조정한 후 121℃에서 15분간 멸균한다.

Ⅸ. (현행과 같음)