문서번호	종보전연구실-2657
결재일자	2016.6.13.
공개여부	대시민공개
방침번호

						시 민
주무관		주무관		종보전연구실장
유미현		여용구		06/13 어경연
협 조
	주무관				장준화

멸종위기 남생이 증식복원연구 기반

원종 확보를 위한 유전자 분석 결과보고

종보전연구실

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일자리	● 일자리 창출 효과 및 일자리 수를 검토하였습니까? 예) 직·간접 채용, 취업알선, 전문인력양성, 창업지원 등	□	■
선거법	● 공직선거법에 저촉 여부를 검토하였습니까? 예) 홍보물 배포, 표창수여, 경품지급, 기부행위 등	□	■
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홍 보	● 사업 홍보 방안을 검토하였습니까? 예) 보도자료, 기자 설명회, 현장 설명회 등	□	■
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멸종위기 남생이 증식복원연구 기반

원종 확보를 위한 유전자 분석 결과보고

멸종위기 야생동·식물 Ⅱ급이자 천연기념물 453호인 남생이의 증식 복원

연구를 위해 번식장 및 남미관, 곤충관 개체를 대상으로 원종 확보를 위한

유전자분석을 실시하고 그 결과를 보고함

Ⅰ				추 진 내 용
		c

분석대상 : 남생이

분석대상 : 12개체

▷ 남미관 보유개체의 혈액 1개(1)

▷ 곤충관 보유개체의 혈액 2개(1, 2)

▷ 번식장 보유개체의 혈액 9개(2, 3, 10, 12, 13, 15, 17, 18, 19)

* 번식장 개체 세부 내역

연번	샘플명	종류	채취일자	개체내역	성별	개체위치
2	②	혈액	2012.08.01	․임시번호 : 기증(G)	F	대형폰드
3	③	혈액	2012.08.01	․임시번호 : 구입(7번)	F	대형폰드
10	한국-⑩	혈액	2012.08.01	․등번호 : 7번	F	한국산란장
12	한국-⑫	혈액	2012.08.01	․등번호 : 8번	F	한국산란장
13	한국-⑬	혈액	2012.08.01	․등번호 : 4번	F	한국산란장
15	⑮	혈액	2012.08.01	․등번호 : 6번	F	한국산란장
17	⑰	혈액	2012.08.01	․남미관 기증	M	온실수조(D-3)
18	⑱	혈액	2016.06.03	․D2011-18-U	F	온실수조(I-3)
19	⑲	혈액	2016.06.03	․곤충관

분석방법

DNA 추출 및 염기서열 결정

- DNA 추출 : DNeasy Tissue Kit 사용

- 유전자분석 부위 : 미토콘드리아 DNA cytochrome b gene 1140bp

- PCR 증폭 및 염기서열 결정에 사용된 Primer : 4종

*cytb primer : GLLUDGE, THR8, turtleCytb1F, turtleCytb1R

- CLUSTAL W를 이용하여 multiple alignment, Mega 6 program, CLC workbench

- 환경부 결과보고서 참조 CYTB Haplotype의 염기치환 수와 위치 비교 분석

*유전적 계통도는 작성을 위해 필요한 Rawdata 미확보로 Pylogenetic tree작성 불가

Ⅱ				분 석 결 과
		c

환경부 발표(2016.02) 남생이 증식·복원 연구(3차년도)

최종보고서의 유전자분석 결과

CYTB 유전자 염기서열 중 6Haplotype의 염기치환 수와 위치

Haplotype	No. of substitution	Nucleotide position in CYTB sequence
		1 6 5	2 0 2	2 0 6	2 4 6	2 8 1	3 9 6	5 5 2	5 5 8	5 6 7	7 1 8	9 4 0	9 4 7	9 7 3	9 8 4
Hap01 (중국산)	0	C	G	A	T	G	T	T	C	T	T	C	C	T	T
Hap02	1	·	·	G	·	·	·	·	·	·	·	·	·	·	·
Hap03 (한국산)	6	·	·	·	·	·	C	·	T	·	C	G	G	·	C
Hap04	8	T	A	·	C	·	C	C	·	C	C	·	·	C	·
Hap05	7	T	·	·	C	·	C	C	·	C	C	·	·	C	·
Hap06	1	·	·	·	·	A	·	·	·	·	·	·	·	·	·

남생이 haplotype 서열들에 대한 NJ tree

- 국내 서식 남생이 분석 결과 크게 2가지 형으로, 한국 남생이과 중국 남생이로 구분

▷ 국내 서식 남생이 주로 Hap01, Hap03으로 나뉨

▷ 한국남생이는 체형이 길고 어두운 흑갈색을 띄며, 복갑판 사이의 선이 회색 빛을 띔                         중국남생이는 체형이 둥글고 적갈색을 띄며, 복갑판 사이의 선이 밝은 노란색을 띔

- Hap03이 한국 남생이 고유의 haplotype인 것으로 판단되며

A2 cluster와 Hap03을 기준으로 한국과 중국 남생이 집단을 구분

▷ Hap03은 중국 남생이에서는 전혀 나타나지 않았으며 그 분포는

대만(n=1), 한국(n=24), 일본(n=103)순으로 높아짐

▷ 일본 남생이 집단이 한국 남생이 집단과 모계적으로 근연의 관계, 일본 남생이

집단의 일부는 한국남생이 집단을 모계로 하여 유입되었을 것으로 추정

우리원 번식장, 곤충관, 남미관 유전자분석 결과

- 2종류의 haplotype이 구분되었으며,

▷I그룹은 8개체(곤충관 2개체, 번식장 6개체)가 포함되며 환경부 보고서의

HAP01에 해당, 즉 중국 남생이 집단

▷II그룹은 4개체(남미관 1개체, 번식장 3개체)가 포함되며 환경부 보고서의

HAP03에 해당, 즉 한국 남생이 집단

Haplotype	개체내역	Nucleotide position in CYTB sequence
		1 6 5	2 0 2	2 0 6	2 4 6	2 8 1	3 9 6	5 5 2	5 5 8	5 6 7	7 1 8	9 4 0	9 4 7	9 7 3	9 8 4
I그룹 (8개체)	곤충관(1,2), 번식장(3,10,13, 17,18,19)	C	G	A	T	G	T	T	C	T	T	C	C	T	T
II그룹 (4개체)	남미관(1), 번식장(2,12,15)	·	·	·	·	·	C	·	T	·	C	G	G	·	C

Ⅲ				향 후 계 획
		c

곤충관 및 남미관 남생이 번식장으로 이동 및 지속적 개체 관리

한국산 및 중국산 남생이의 분리사육 및 과학적이고 쳬계적인 개체관리

추후 환경부 발표 4차 보고서를 검토하여 mtDNA control region이나

cytochrome c oxidase Ⅰ subunit (COⅠ)등 다른 유전자 서열의 정보와

핵 DNA MS marker 등을 이용한 추가적인 분석 시도

Ⅳ				참 고 문 헌
		c

남생이(Mauremys reevesii) 증식·복원 연구(3차년도) 최종보고서

끝.