서울特別市 保健環境硏究院報 第39號	(2003)

Report of S.I.H.E., 39:588~597	(2003)

소분변과 도체에서 E. coli O157:H7의

분리와 항생제감수성 검사

인수공통전염병팀

채희선․김종화․김규현․최태석․신방우․이덕주․이정학

The Isolation and Antimicrobiol Susceptibility of Escherichia coli O157:H7 on Bovine feces and Carcass

Zoonosis Team

Hee-sun Chae, Jong-hwa Kim, Gyu-hyeon Kim, Tae-seok Choi, Bang-woo Shin, Duck-joo Lee and Jung-hark Lee

Abstract

In this study, a total of 2,119 samples was taken from bovine feces and carcass from March 2002 to December 2003. And those were examined for the presence of enterohemorrhagic E. coli O157:H7. The properties of the isolates were characterized for biochemical features, serotypes, virulence genes and antimicrobial susceptibility. Forty five strains(3.7%) of E. coli O157:H7 were isolated from 1,208 fecal samples and were not detected in carcass using immunomagnetic separation technique and selective media. In multiplex PCR using stx1, stx2, eaeA and hlyA primers, the amplified bands at 180bp, 255bp, 384bp and 534bp were observed, respectively. In antimicrobial susceptibility test, all isolates were susceptible to amoxicillin/clavulanic acid and cefazolin. The isolates were most resistant to sulfisoxazole(24.4%), followed by streptomycin(22.2%), tetracycline(20.0%). Eight strains(17.8%) of 45 isolates showed the multi-resistant patterns with over 3 drugs.

Key words : antimicrobiol susceptibility, Escherichia coli O157:H7, bovine feces, carcass

서  론

Escherichia coli(E. coli) O157:H7은 1982년 미국에서 출혈성 장염에 이환된 환자로부터 최초로 분리 보고되었으며(1), 다음 해에는 출혈성 신증후군(hemolytic uremic syndrome; HUS)이 E. coli O157:H7 감염과 연관성이 있다고 보고되었다(2). 이 균의 감염증은 일본에서 크게 유행하여 1996년에는 1만여 명의 환자가 발생하였고 11명이 사망함으로써  E. coli O157:H7은 세계적으로 관심을 불러일으키고 이에 대한 연구가 활발히 수행되었다(3). 우리나라에서는 1994년에 최초로 국립보건원에서 설사환자로부터 E. coli O157이 분리되었다고 보고한 바 있다(4).

E. coli O157:H7의 가장 중요한 병원성 인자는 shiga toxin이며, 이 독소는 vero cell에 세포독성효과를 나타내므로 일명 verotoxin이라고도 불린다(5~8). 그러나 stx 유전자에 암호된 shiga toxin 단독으로는 E. coli O157:H7 특유의 병원기전을 나타내지 못하는 경우가 많으며(8, 9), 대개 eaeA 유전자에 암호되어 장관상피세포의 attaching and effacing(AE) 병변을 일으키는 인자와 hlyA 유전자에 암호되어 장관내 출혈을 일으키는 인자와 공동으로 작용해야 한다고 알려져 있다(10, 11).

가축 가운데 소는 E. coli O157:H7의 가장 중요한 보균동물로 간주되고 있으며(12), 면양, 산양, 돼지, 사슴, 닭, 칠면조 등에서도 이 균이 검출된다고 보고되어 다양한 동물들이 이 균의 보균숙주 역할을 하는 것으로 지적되고 있으며(13) 인수공통전염병원체로 E. coli O157:H7의 중요성이 날로 높아가고 있다(14).

본 연구는 서울도축장에서 도축되는 건강한 소의 분변과 도체로부터 IMS기법을 이용하여 E. coli O157:H7을 분리하고, 분리균주에 대해 생화학적 성상 및 multiplex PCR법을 이용한 병원성 유전자를 조사하고, 아울러 항생제에 대한 감수성을 조사하였다.

재료 및 방법

1. E. coli O157:H7의 분리

1) 시료채취

2002년 3월부터 2003년 12월까지 서울시 소재 도축장에서 도축된 소분변 1,208건 및 소도체 911건에 대하여, 소의 분변 5～10g을 분변채취용기(Greiner, Germany)에 채취하고, 소의 도체표면을 easy swab(Komed, Korea)으로 swabing하여 20시간 내에 실험에 사용하였다.

2) Immunomagnetic separation(IMS) 기법을 이용한 균분리

증균배양: 채취한 분변에 novobiocin(20mg/ℓ)이 첨가된 Modified E. coli medium(Merck, France)을 10배량을 넣은 후 잘 혼합하여 37℃에서 18～20시간 진탕 배양하였다.

Immunomagnetic separation : 증균된 배양액을 잘 혼합하여 1㎖를 에펜도르프튜브에 넣은 후 E. coli O157항체가 코팅된 magnetic bead를 20㎕를 넣고 20분간 실온에서 교반하여 반응시켰다. 교반된 튜브를 Magnetic concentrator(Dynal, Norway)에 5분간 부착시켜 항원과 결합된 bead를 채집하고 PBST(0.05% Tween 20을 첨가한 phosphate-buffered saline, pH 7.2) 1㎖를 넣어 세척하였다. 이 과정을 2～3회 반복한 후 세척된 bead에 mEC medium 50㎕를 넣어서 부유시킨 후 멸균된 면봉으로 Chromogenic medium (O157:H7 ID medium, Biomerieux, France)과 CT-SMAC(Merck, Germany ; cefixime 0.05mg/ℓ, potassium tellulite 2.5mg/ℓ 첨가)에 각각 도말하여 37℃에서 18～20시간 배양하였다. 다음날 전형적인 집락들을 채취하여 E. coli O157 latex test kit(Oxoid, England)로 응집반응검사를 하였고, 응집반응 양성을 보인 집락을 MacConkey agar(Merck, Germany)에 도말배양하여 lactose 분해능을 확인하였다.

3) 생화학적 성상검사

MacConkey에서 순수분리된 집락을 Tryptic soy agar(Merck, Germany)에 계대하여 단독집락을 채취하여 0.85% NaCl medium(Biomerieux, France)에 부유시키고 McFarland No. 0.5 탁도로 조정하고 ID 32E 킷트(Biomerieux, France)에 접종하여 37℃에서 18～24시간 이상 배양한 후 판독하였다. 이 과정을 통해 ornithin decar- boxylase 외 31종에 대한 분리균의 당분해능과 효소활성능 그리고 기질생산능 등에 대한 생화학적 성상을 검사하였다.

4) 혈청학적 검사

O 항혈청 응집반응 : 균주를 Tryptic soy agar에 배양한 후 신선한 집락을 식염수(0.85%)가 들어있는 시험관에 부유하고 이 부유액을 100℃에서 30～60분간 끓였다. 이어서 실온에서 식힌 부유액을 식염수(0.85%)로 MacFarland No. 3 탁도로 조정하고 그 균액에 최종농도가 0.5%되게 form- aline을 첨가하였다. 그 다음 O157항혈청(Difco, USA)을 1:20부터 1:1,280까지 계단희석하고, 생리식염수(0.85%) 0.9㎖를 첫 번째 시험관에 넣고 나머지 7개 시험관에는 0.5㎖를 넣어 계단희석을 실시하였다. 혈청희석액에 동량의 시험균액을 첨가하고 잘 섞어준 후 48～50℃의 항온수조에 넣어서 18～20시간 반응시켜서 그 응집상태를 확인하였다.

H 항혈청 응집반응 : O157 항혈청 응집반응에서 양성반응을 보인 균주에 대해 실시하였다. 세균의 편모형성을 증진시키기 위하여 Motility test medium(Becton dickinson, USA)에 3～5회 계대배양한 다음, 계대배양된 균주를 Veal infusion broth(Difco, USA)에 다시 접종하여 35～37℃에서 6～8시간 배양하였으며 배양된 시험관에 최종 농도가 0.3%가 되도록 formalin을 첨가하여 혼합한 후 약 30분간 정치시켰다. 이어서 H7 항혈청(Difco, USA)을 식염수(0.85%)로 1:500이 되게 희석하고 0.3～0.5㎖을 시험관에 분주하였고, 여기에 동량(0.3～0.5㎖)의 준비된 균액을 넣어 혼합한 뒤 50℃의 항온수조에서 1시간 동안 반응시킨 후 응집상태를 관찰하였다.

2. Polymerase chain reaction(PCR)

1) 공시균주

소분변에서 분리된 E. coli O157:H7 45주를 공시하였으며, stx1, stx2, eaeA 그리고 hlyA 유전자를 보유한 표준 균주 E. coli O157:H7(ATCC 43894)를 공시하였다.

2) Genomic DNA의 추출

순수 분리주를 Brain heart infusion broth (BHI ; Difco, USA)에 접종하여 37℃에서 18～24시간 배양시킨 후 1㎖ 에펜도르프튜브에 분주하였다. 그 후 12,000rpm에서 2분간 원심분리하여 얻어진 pellet을 PBS(phosphate-buffered saline, pH 7.2) 500㎕로 2회 세척한 후 증류수 200㎕에 재부유하고, 100℃에서 약 10분간 끓인 후 즉시 얼음에 담갔다가, 12,000rpm에서 2분간 원심 시켜서 얻어진 상층액을 사용하였다.

3) Primers

소에서 분리된 E. coli O157:H7 45주에 대하여 병원성 인자를 암호하는 stx1, stx2, eaeA, hlyA 유전자에 대한 primers를 바이오니아(Chung- buk, Korea)에 제작 의뢰하여 공시하였다. 각각의 primer에 대한 sequence와 예상되는 증폭 DNA 크기는 표 1에 기술하였다.

4) PCR 조건

2㎕의 template DNA, 1μM의 각각의 primer, 2.5mM의 dNTP mixture, 10X PCR buffer 5㎕, 2.5U Taq polymerase(TaKaRa, Japan)을 넣어 총 용량이 50㎕이 되게 실시하였다. 병원성 유전자 stx1, stx2, eaeA 및 hlyA를 검출하기 위한 PCR은 35 cycle을 실시하였으며, 처음 10 cycles은 95℃ 1분간 denaturation, 65℃ 2분간 annealing, 72℃ 1분 30초간 extension과정을 실시하였으며, 15 cycles은 annealing 온도를 60℃까지 줄여서 실시하였으며, 25～35 cycle은 extension 시간을 2.5분으로 늘여서 수행하였다. 마지막의 extension은 5분으로 하였다. PCR 반응산물은

Table 1. Primer sequences used in the PCR and the expected sizes of products

Primersa	Sequences(5'-3')	Targets	Size(bp)
stx1F	ATAAATCGCCATTCGTTGACTAC	stx1	180
stx1R	AGAACGCCCACTGAGATCATC
stx2F	GGCACTGTCTGAAACTGCTCC	stx2	255
stx2R	TCGCCAGTTATCTGACATTCTG
eaeAF	GACCCGGCACAAGCATAAGC	eaeA	384
eaeAR	CCACCTGCAGCAACAAGAGG
hlyAF	GCATCATCAAGCGTACGTTCC	hlyA	534
hlyAR	AATGAGCCAAGCTGGTTAAGCT
a References : Adwan et al.(15), Hu et al.(16), Paton et al.(17)

2% agarose gel상에서 100V에서 30분간 전기영동한 후 ethidium bromide(0.5㎍/㎖)로 염색하여 확인하였다.

3. 항생제 감수성검사

소분변에서 분리된 E. coli O157:H7 45주를 National Committee for Clinical Laboratory Standards(NCCLS)의해 인증된 디스크 확산법에 의해 실험하였다(18). 항생제 디스크는 BBL sensi-disc(Becton dickinson, USA)를 사용하여 amikacin, amoxicillin/clavulanic acid, ampi- cillin, carbenicillin, cefaclor, cefazolin, cefo- taxime, chloramphenicol, ciprofloxacin, colis- tin, gentamicin, kanamycin, streptomycin, sulfisoxazole, tetracycline, trimethoprim/ sulfamethoxazole의 16종의 항생제에 대한 감수성을 검사하였다. Tryptic soy agar(Merck, Germany)에서 자란 4～5개의 집락을 Mueller hinton broth(Difco, USA)에 부유시키고 Den- sitmat(Biomerieux, France)기로 탁도가 Mc- Farland No. 0.5가 되도록 조정한 다음 균액을 Mueller hinton agar(Difco, USA)에 도말하고 3～5분간 건조시켰다. 그 후 Disc dispenser (Becton dickinson, USA)를 이용하여 디스크를 옮겨 심고 37℃에서 2일 동안 배양하여 발육억제대를 측정하였다.

결과 및 고찰

1. E. coli O157:H7 분리

2002년 3월부터 2003년 12월까지 소 분변 1,208건과 도체 911건에 대하여 immunomagne- tic separation기법으로 E. coli O157:H7의 분리를 시도한 바, 소분변으로부터 45(3.7%)주가 검출되었다. 세계적으로 여러 동물에서 E. coli O157: H7은 분리와 특성에 관한 활발한 연구가 이루어져 있으며(19~21), 분리율은 동물의 종류와 다양한 외적 환경에 따라 다양하게 보고되었다. Bonardi 등(19)은 소의 분변에서 E. coli O157: H7의 분리율이 13.1%이었고, Heuvelink 등(20)은 성우의 분변에서 10.6%, 송아지에서 0.5%, 양에서 4.1%, 돼지 분변에서 1.4% 그리고 칠면조 분변에서 1.3%가 분리되었다고 보고하였다. Lahiti 등(21)은 소분변에서 1.31%, 의 E. coli O157:H7이 각각 분리되었다고 보고하였다. 국내에서는 차 등(22)이 소와 돼지의 분변에서 각각 0.76%와 0.51%를 분리 보고한바 있고, 고와 홍(23)이 쇠고기에서 2건(1.1%)를 분리한 예가 있었다.

2. 분리균의 생화학적 성상 및 혈청학적 검사

분리된 45주의 E. coli O157:H7에 대해 당분해능, 효소활성능 및 기질생산성을 검사한 결과, ornithin decarboxylase, lysin decarboxylase, galacturonate, phenol red, maltose, αga- lactosidase, glucose, L-arabinose에서는 45주 모두 양성반응을 보였다. Mannitol은 43주(95.5%), indol은 44주(97.7%), saccharose   는 20주(44.4%), trehalose는 8주(17.8%), rhamnose에서는 2주(4.4%)가 양성반응을 나타내었다. 그 외에 arginine dihydrolase, urease, L-arabitol,  5-ketogluconate,  lipase,  β- glucosidase, adonitol, palatinose, malonate, N-acetyl-β-glucosaminidase, β-glucuronidase, α-glucosidase, inositol, cellobiose, sorbitol, α-maltosidase, L-aspartic acid arylamidase에 대해서는 45주 모두 활성을 나타내지 않았다.

분리주에 대하여 항혈청을 이용한 응집반응을 실시한 결과 45주 모두 O157 항혈청에 응집되었다. Motility test medium에서 45주 모두 운동성을 나타내었으며, H7 항혈청에 양성반응을 보였다.

E. coli O157:H7은 sorbitol을 분해하지 못하고 β-glucuronidase에 대한 활성을 보이지 않는 특성이 있으며 다른 E. coli와 비교할 때 ornithine decarboxylase, arginine dihydrolase, usease와 5-ketogluconate에 대해서도 생화학적으로 다른 활성을 보이며, adonitol, D-arabitol, trehalose, rhamnose에 대해서도 다소 다른 양상을 나타낸다(5, 24). 본 실험에서 분리된 45주는 모두 sor- bitol을 분해하지 못하고, β-glucuronidase에 활성을 보이지 않아 전형적인 E. coli O157:H7의 성상을 보였다.

M    R     1    2     3    4     5    6    7    8     9    10   11   12   M

534bp →

384bp →

255bp →

180bp →

Lane M ; 100bp DNA ladder

Lane R ; positive control (E. coli O157:H7, ATCC 43894)

Lanes 1 to 12 ; E. coli isolates

Fig. 1. Multiplex PCR patterns of E. coli O157:H7 isolated from the feces of the slaughtered cattle.

3. Multiplex PCR

병원성 인자를 암호하는 stx1, stx2, eaeA 그리고 hlyA 유전자를 검출하기 위하여 E. coli O157:H7 45주에 대하여 multiplex PCR을 실시한 결과는 그림 1에서와 같이 180bp, 255bp, 384bp 및 534bp 크기의 증폭산물이 균주에 따라 다양하게 나타났다.

45주의 모든 분리주는 eaeA와 hlyA 유전자를 가지고 있었으며, stx1만 가지고 있는 분리주는 1주(2.2%), stx2 유전자만을 가지고 있는 분리주는 21주(46.7%), 그리고 stx1과 stx2를 동시에 가지고 있는 분리주는 18주(40.0%)로 나타났으며, stx1과 stx2를 모두 가지고 있지 않은 분리주는 5주(11.1%)이였다(표 2).

병원성 인자의 분포패턴은 위와 같이 4가지 유형으로 구분되며 Hu(16)등과 Paton과 Paton(17)의 결과와 유사하였다. 따라서 대부분의 분리주들은 인체에 감염시 verotoxin을 생산하여 병원성을 발현할 수 있는 잠재력이 있다고 생각된다.

4. 항생제 감수성검사

Table 2. Patterns of the multiplex PCR of 45 isolates of E. coli O157:H7

Organisms	No. of strains isolated(%)	Multiplex PCR assay
		stx1	stx2	eaeA	hlyA
E. coli O157:H7	5(11.1)	-	-	+	+
E. coli O157:H7	1(2.2)	+	-	+	+
E. coli O157:H7	21(46.9)	-	+	+	+
E. coli O157:H7	18(40.0)	+	+	+	+

E. coli O157:H7 45주에 대하여 항생제 감수성검사를 실시한 결과는 표 3과 같다. Amikacin외 15종의 항생제 중에서 amoxicillin/clavulanic acid와 cefazolin은 45주(100%) 모두에서 감수성을 나타내었으며, cefotaxime과 colistin, cefa- clor, amikacin은 44주(97.8%)에서 감수성을 보였다. 가장 내성이 높게 관찰된 항생제는 sulfi- soxazole로써 45주 중에서 11주(24.4%)가 나타났으며, streptomycin에서 10주(22.2%), tetra- cycline에서 9주(20.0%)가 내성을 보였다.

Table 3. Antimicrobial susceptibility of 45 E. coli O157:H7 isolates from the feces of the slaughtered cattle

Antimicrobial agents	Disc potency(μg)	No. of isolates(%)
		Susceptible	Intermediate	Resistant
Amikacin	30	44(97.8)		1(2.2)
Amoxicillin/ Clavulanic acid	20/10	45(100)		0(0)
Ampicillin	10	40(88.9)		5(11.1)
Carbenicillin	100	37(82.2)	4(8.9)	4(8.9)
Cefaclor	30	44(97.8)		1(2.2)
Cefazolin	30	45(100)		0(0)
Cefotaxime	30	44(97.8)		1(2.2)
Chloramphenicol	30	43(95.6)		2(4.4)
Ciprofloxacin	5	44(97.8)		1(2.2)
Colistin	10	44(97.8)		1(2.2)
Gentamicin	10	42(93.4)		3(6.6)
Kanamycin	30	41(91.1)		4(8.9)
Streptomycin	10	33(73.3)	2(4.4)	10(22.2)
Sulfisoxazole	250	34(75.6)		11(24.4)
Tetracycline	30	36(80.0)		9(20.0)
Trimethoprim/ Sulfamethoxazole	1.25/23.75	43(95.6)		2(4.4)

분리주 중 3가지 이상의 항생제에 대제 내성을 나타낸 것은 8주(17.8%)이었으며, 이 중 1주(2.2%)는 ciprofloxacin, cefotaxime, streptomycin, colistine, cefaclor, sulfisoxazole, gentamicin, amikacin에, 또 다른 2주(4.4%)는 streptomycin, sulfisoxazole, ampicillin, kanamycin, carbeni- cillin, tetracycline에, 2주(4.4%)는 streptomy- cin, sulfisoxazole, gentamicin, ampicillin, kanamycin, trimethoprim/ sulfamethoxazole, chloramphenicol, carbenicillin, tetracycline에, 그리고 3주(6.6%)는 streptomycin, sulfisoxa- zole, tetracycline에 다제내성을 각각 보였다.

Meng 등(25)은 소와 사람과 식품에서 E. coli O157:H7을 분리하여 항생제 감수성검사를 실시한 결과 분리주에서 24%가 최소한 1가지 이상의 약제에 내성을 보였으며, 19%가 3가지 또는 그 이상의 항생제에 내성을 보였고, 소에서 분리된 균주에서 내성율이 34%로 가장 높다고 하였으며, 이는 가축에서의 성장촉진과 치료목적으로 투여한 항생제가 소에서의 내성율을 높인다고 보고하였다. Schroeder 등(26)은 tetracycline에서 27%, sulfamethoxazole에서 26%가 내성을 보였고,   3가지 이상의 약제에 대한 다제내성이 15%로   보고하여 본 시험에서 얻어진 다제내성 빈도(16.2%)와 유사하였다. Threlfall 등(27)은 식품에서 분리된 E. coli O157:H7의 다제내성은 높은 편이 아니나 streptomycin, sulphonamides 그리고 tetracyclines에서는 내성율이 높게 나타난다고 보고하였고, 이 내성율은 1994년 이후로 계속 증가하고 있다고 시사하였다. E. coli O157:H7의 가장 흔한 내성유형은 streptomycin - sulfiso - xazole-tetracycline이었으며(25, 28), 본 연구에서 나타난 내성유형과 거의 일치하였다.

Dupont 등(29)이 임상적으로 EHEC 감염에 기인한 출혈성 설사 환자의 증세가 HUS로 진행되는 것을 막기 위해 감염초기에 trimethoprim- sulphamethoxazole 등의 치료가 유효하다고 보고하였으나, 항생제의 사용은 세균의 용균을 야기하여 장내에 shiga toxin을 유리시킬 수 있으며, 특히 fluoroquinolones같은 항생제의 경우 shiga toxin의 유전자 발현을 유도하여 증세를 악화시킬 수도 있다고 지적한 바 있다(28).

우리나라 정상 소의 분변에서의 E. coli O157: H7의 분리율은 외국의 보고보다는 낮게 나타났으나, 소의 육회나 생간을 날것으로 먹는 식습관이나 패스트푸드와 냉동식품의 확대보급으로 이 균에 의한 감염가능성이 점차 높아지는 추세이다. 이에 따라 식중독의 예방 및 안전한 축산물의 생산을 위하여 E. coli O157:H7의 지속적인 검사와 그에 따른 도축장의 위생관리의 강화에 더욱 힘써야 할 것으로 사료된다.

결  론

2002년 3월부터 2003년 12월까지 서울시 도축장에서 소분변 1,208두와 도체표면 911건을 채취하여 E. coli O157:H7의 분리를 실시하였다. 분리된 45주에 대해 생화학적 및 혈청학적 검사를 실시하고, multiplex PCR로 병원성 인자를 검출하고, 분리주에 대한 항생제내성검사를 실시한 바 다음과 같은 결과를 얻었다.

1. Immunomagnetic separation(IMS)법을 이용하여 1,208건의 소분변으로부터 45주(3.7%)의 E. coli O157:H7이 분리되었고, 911건의 소 도체표면에서는 한건도 분리되지 않았다.

2. 분리된 45주에 대해 생화학적 검사를 실시한 결과  45주 모두가 sorbitol을 분해하지 못하고, β-glucuronidase에 활성을 보이지 않아 전형적인 E. coli O157:H7의 성상을 보였다. 분리주에 대한 항혈청을 이용한 응집반응을 실시한 결과 45건 모두 혈청형이 O157:H7으로 나타났다.

3. 45주의 분리주에 대해 병원성인자를 암호하는 stx1, stx2, eaeA 및 hlyA 유전자에 대한 multiplex PCR을 실시한 결과 eaeA와 hlyA유전자는 45주에서 모두 검출되었고, stx1만을 보유한 분리주는 1주(2.2%), stx2만을 가진 분리주는 21주(46.7%), stx1과 stx2를 동시에 가진 분리주는 18(40.0%)주이었고, 나머지 5주(11.1%)는 stx1과 stx2 모두 가지고 있지 않았다.

4. 항생제 감수성 검사를 실시한 결과 amoxi- cillin/clavulanic acid와 cefazolin은 45주 모두에서 감수성을 나타내었으며 내성이 높게 관찰되는 항생제는 sulfisoxazole에서 11주(24.4%), streptomycin에서 10주(22.2%), tetracycline에서 9(20.0%)주로 나타났다. 그리고 3가지 이상의 다제내성 양상을 보인 분리주는 8주(17.8%)였다.

참고문헌

1. Ostroff SM, Tarr PI, Neill MA, Lewis JH, Hargret-Bean N and Kobayashi JM : Toxin genotypes and plasmid profiles as determinants of systemic sequelae in Escherichia coli O157:H7 infections. J. Infect. Dis, 160:994~998, 1989.

2. Karmali MA, Steele BT, Petric M and Lim C : Sporadic cases of haemolytic- uraemic syndrome associated with faecal cytotoxin and cytotoxinproducing Esche- richia coli in stools. Lancet, 1:619~620, 1983.

3. Iwasa M, Makino S, Asakura H, Kobori H and Morimoto Y : Detection of Escherichia coli O157:H7 from musca domestica(Diptera:Muscidae) at a cattle farm in Japan. J. Med. Entomol, 36: 108~112, 1999.

4. 국립보건원 : 감염병 발생정보, 5:131~142, 1994.

5. Louie M, Read S, Louie L, Ziebell K, Rahn K, Borczyk A and Lior H : Molecular typing methods to investigate transmission of Escherichia coli O157:H7 from cattle to humans. Epidemiol. Infect, 123:17~24, 1999.

6. Pruimboom-Brees IM, Morgan TW, Ac- kermann MR, Nystrom ED, Samuel JE, Cornick NA and Moon HW : Cattle lack vascular receptors for Escherichia coli O157:H7 shiga toxins. Pans, 97:10325~ 10329, 2000.

7. Thomas A, Cheasty T, Frost JA, Chart H, Smith HR and Rowe B : Verocyto- toxin-producing Escherichia coli, parti- cularly serogroup O157, associated with human infections in England and wales : 1992-4. Epidemiol. Infect, 117:1~10, 1996.

8. 강동현 : 식품 병원균인 Escherichia coli O157:H7의 중요성. J. Food Hygiene. Safety, 12:367~378, 1997.

9. Hideki K, Jun S, Muneo N, Tetsuo M, Tarja P, Sinikka P and Koshi Y : Prevalence and characteristics of shiga toxin-producing Escherichia coli from healthy cattle in Japan. Appl. Enviro. Microbiol, 67:484~489, 2001.

10. 정석찬, 정병열, 윤장원, 조윤상, 김종염, 박용호 : 쇠고기중 Escherichia coli O157:H7  신속검출을 위한 multiplex-PCR 기법 개발. 대한수의학회지, 38:173~181, 1998.

11. Feng P and Monday SR : Multiplex PCR for detection of trait and virulence factors in enterohemorrhagic Escherichia coli serotypes. Mol. Cell. Probes, 14: 333~337, 2000.

12. Johnsen G, Wasteson Y, Heir E, Berget OI and Hallgeir H : Escherichia coli O157:H7 in feces from cattle, sheep and pigs in the southwest part of Norway during 1998 and 1999. Int. J. Food Microbiol, 65:193~200, 2001.

13. Wang G, Zhao T and Doyle MP : Fate of enterohemorrhagic Escherichia coli O157: H7 in bovine feces. Appl. Enviro. Microbiol, 62:2567~2570, 1996.

14. Mead PS and Griffin PM : Escherichia coli O157:H7. Lancet, 352 : 1207~1212, 1998.

15. Adwan K, Abu-Hasan N, Essawi T and Bdir M : Isolation and characterisation of shiga toxigenic Escherichia coli strains from northern Palestine. J. Med. Microbiol, 51:332~335, 2002.

16. Hu Y, Zhang Q and Meitzler JC : Rapid and sensitive detection of Escherichia coli O157:H7 in bovine faeces by multiplex PCR. J. Appl. Microbiol, 87: 867~876, 1999.

17. Paton AW and Paton JC : Detection and characterization of shiga toxigenic Escherichia coli by using multiplex PCR assays for stx1, stx2, eaeA, enterohe- morrhagic E. coli hlyA, rfbO111, and rfbO157. J. Clin. Microbiol, 36:598~602, 1998.

18. National Committee for Clinical Labora- tory Standards : Performance standards for antimicrobial disk susceptibility tests-6th ed. NCCLS, Wayne, Pa.(1997)

19. Bonardi S, Maggi E, Bottarelli A, Pacciarini ML, Ansuini A, Vellini G, Morabito S and Caprioli A : Isolation of verocytotoxin-producing Escherichia coli O157:H7 from cattle at slaughter in Italy. Vet. Microbiol, 67:203~211, 1999.

20. Heuvelink AE, Biggelar FLAM, Boer E, Herbes RG, Melchers WJG, Huis JHJ and Monnens LAH : Isolation and cha- racterization of verocytotoxin-producing Escherichia coli O157 strains from dutch cattle and sheep. J. Clin. Microbiol, 36:878~882, 1998.

21. Lahti E, Keskimaki M, Rantala L, Hyvonen P, Siitonei A and Honkanen- Buzalski T : Occurrence of Escherichia coli O157 in finnish cattle. Vet. Microbiol, 79:239~254, 2001.

22. 차인호, 김용환 : 동물분변에서 Escherichia coli O157:H7의 분리 및 이들 균이 생산하는 Verotoxin-2의 생물화학적 특성(Ⅰ. 소와 돼지의 분변에서 Escherichia coli O157:H7의 분리 및 Verotoxin-2 생산에 관여하는 파아지의 분리에 관하여). 대한수의학회지, 36: 371~378, 1996.

23. 고주언, 홍종해 : 도체표면의 분변오염과 vero- toxin 생성. Food Hygiene Safety, 12:78~ 82, 1997.

24. Leclercq A, Lambert B, Pierarad D and Mahillon J : Particular biochemical pro- files for enterohemorrhagic Escherichia coli O157:H7 isolates on the ID 32E system. J. Clin. Microbiol, 39:1161~ 1164, 2001.

25. Meng J, Zhao S, Doyle MP and Joseph SW : Antibiotic resistance of Escherichia coli O157:H7 and O157:NM isolated from animals, food and humans. J. Food Prot, 61:1511~1514, 1998.

26. Schroeder CM, Zhao C, Debroy C, Torcolini J, Zhao S, White DG, Wagner DD, McDermott PF, Walker RD and Meng J : Antimicrobial resistance of Escherichia coli O157 isolated from humans, cattle, swine and food. Appl. Enviro. Microbiol, 68:576~581, 2002.

27. Threlfall EJ, Ward LR, Frost JA and Willshaw GA : The emergene and spread of antibiotic resistance in food-borne bacteria. Int. J. Food Microbiol, 62:1~5, 2000.

28. Vila J, Vargas M, Casals C, Urassa H, Mshinda H, Schellemberg D and Gascon J : Antimicrobial resistance of diarrhe- agenic Escherichia coli isolated from children under the age of 5 years from Ifakara, Tanzania. Antimicrob. Agents Chemother, 43:3022~3024, 1999.

29. Dupont H, Timsit JF, Souweine B, Gachot B, Wolff M and Regnier B : Antimicrobial susceptibility of Esche- richia coli O157 and other entero- haemorrhagic Escherichia coli isolated in Italy. Clin. Reanim. Malad. Infect, 15:351~353, 1996.